| 描述 |
ML335 是 TREK-1 和 TREK-2 的选择性激活剂。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
TREK-1, TREK-2
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| 体外研究 |
非洲爪蟾卵母细胞双电极电压钳测量显示ML335和ML402激活K2P2.1和K2P10.1但不激活K2P4.1(14.3±2.7μM,K2P2.1-ML335; 13.7±7.0μM,K2P2.1-ML402; 5.2±0.5μM,K2P10.1-ML335;和5.9±1.6μM,K2P10.1-ML402)。将K2P2.1和K2P4.1之间的Lys271等价物交换导致ML335和M402活化的明显表型逆转。 ML335和ML402在HEK293细胞中激活K2P2.1,类似于它们在非洲爪蟾卵母细胞中的作用(ML335和ML402分别为5.2±0.8μM和5.9±1.6μM(n≥3))[1]。
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| 细胞实验 |
小鼠K2P2.1，人K2P4.1和突变体由先前描述的HEK293T细胞（ATTC）中的pIRES2-EGFP载体表达。用LipofectAMINE 2000转染70％汇合的细胞（在35mm直径的孔中）6小时，并铺在涂有Matrigel的盖玻片上。在转染后24小时，通过全细胞膜片钳实验测量ML335，ML402和花生四烯酸对0mV的K2P2.1电流的影响。使用pCLAMP9和Axopatch 200B放大器进行采集和分析。移液器电阻范围为1至1.5MΩ。移液管溶液含有以下物质：145mM KCl，3mM MgCl 2,5mM EGTA和20mM HEPES（pH 7.2，含KOH）。浴溶液含有以下物质：145mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl 2,3mM MgCl 2和20mM HEPES（pH 7.4，用NaOH）。从-80 mV的保持电位开始，从-100到+50 mV的1 s斜坡引发K2P2.1电流。在稳定基础电流后，ML335和ML402以每小时200mL灌注直至稳定达到增强[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Lolicato M, et al. K2P2.1 (TREK-1)-activator complexes reveal a cryptic selectivity filter binding site. Nature. 2017 Jul 20;547(7663):364-368.
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