描述 |
Neratinib 是一种可口服的,不可逆的 tyrosine kinase 抑制剂,能够抑制 HER2 和 EGFR 的活性,IC50 值分别为 59 nM 和 92 nM。
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相关类别 |
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靶点 |
EGFR:92 nM (IC50)
HER2:59 nM (IC50)
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体外研究 |
Neratinib对酪氨酸激酶KDR和Src具有抑制作用,IC50分别为0.8μM和1.4μM,与HER2相比,活性降低14倍和24倍。 Neratinib对其他丝氨酸-苏氨酸激酶没有活性,如Akt,细胞周期蛋白D1/cdk4,细胞周期蛋白E/cdk2,细胞周期蛋白B1/cdk1,IKK-2,MK-2,PDK1,c-Raf和Tpl-2,以及作为酪氨酸激酶c-Met。 Neratinib选择性抑制转染HER2(3T3/neu)的3T3细胞以及另外两种HER-2过表达SK-Br-3和BT474细胞的增殖,IC50值为2-3 nM,显示> 230倍与未转染的3T3细胞以及EGFR-和HER2-阴性的MDA-MB-435和SW620相比具有效力。 Neratinib还抑制EGFR依赖性A431细胞的增殖,IC50为81 nM。 Neratinib降低BT474细胞中HER2受体的自身磷酸化,IC50为5 nM,A431细胞中EGFR依赖于EGFR的磷酸化,IC50为3 nM。 Neratinib阻断HER-2导致下游MAPK和Akt通路的抑制,IC50为2 nM,比曲妥珠单抗更有效。 Neratinib抑制BT474细胞中细胞周期蛋白D1的表达和Rb易感基因的磷酸化,IC50为9 nM,导致G1-S停滞,最终导致细胞增殖减少[1]。
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体内研究 |
口服治疗的neratinib显着抑制3T3/neu异种移植物的生长,分别在10,20,40和80mg/kg /天的剂量下抑制34%,53%,98%和98%。与在40mg/kg /天给药1小时内HER-2磷酸化抑制84%相一致,Neratinib在5,10的剂量下抑制BT-744异种移植物的生长70-82%,67%和93% ,和40毫克/千克/天。 Neratinib对SK-OV-3异种移植物也有效,在5和60mg/kg /天时分别抑制31%和85%。与HER-2依赖性肿瘤相比,Neratinib对EGFR依赖性A431异种移植物的效力较低,分别在5和20mg/kg /天时具有32%和44%的抑制。 Neratinib对表达低水平HER-2和EGFR的MCF-7和MX-1异种移植物几乎没有活性,在80mg/kg /天时仅有28%的抑制,表明Neratinib对表达HER-2或EGFR的细胞具有选择性活性。 [1]。
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激酶实验 |
将Neratinib制备成DMSO中的10mg / mL储液,并在25mM HEPES(pH7.5; 0.002ng / mL-20μg/ mL)中稀释。将纯化的HER2重组COOH-末端片段(氨基酸676-1255)或表皮生长因子受体(EGFR)(氨基酸645-1186)[在100mM HEPES(pH7.5)和50%甘油中稀释]以增加的浓度温育Neratinib在4mM HEPES(pH7.5),0.4mMMnCl2,20μM钒酸钠和0.2mM DTT中在室温下在96孔ELISA板中15分钟。通过加入40μMATP和20mM MgCl 2引发激酶反应,并使其在室温下进行1小时。洗涤平板,并使用铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体(15ng /孔)检测磷酸化。在洗涤和增强步骤后,使用Victor2荧光读数器(激发波长340nm,发射波长615nm)检测信号。从抑制曲线计算抑制受体磷酸化50%的Neratinib浓度(IC 50)。
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细胞实验 |
将细胞暴露于各种浓度的Neratinib 2或6天。使用磺酰罗丹明B(一种蛋白质结合染料)测定细胞增殖。简言之,将细胞用10%三氯乙酸固定并用水充分洗涤。然后将细胞用0.1%磺酰罗丹明B染色并在5%乙酸中洗涤。将蛋白质相关染料溶解于10mM Tris中,并在450nM下测量吸光度。从抑制曲线确定抑制细胞增殖50%的Neratinib浓度(IC 50)。
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动物实验 |
将肿瘤细胞(维持在组织培养物中)或肿瘤片段皮下植入雌性无胸腺(裸)小鼠的侧腹。对于雌激素依赖性细胞系(BT474,MCF-7和SK-OV-3),在植入肿瘤前1周,给动物植入激素颗粒(0.72mg 17-β雌二醇,60天释放)。另外,将SK-OV-3细胞悬浮在Matrigel基底膜基质中用于植入。在将动物随机分配到不同治疗组(分期,第0天)后,在肿瘤达到90-200mg的大小后开始治疗。对于3T3 / neu异种移植物,在肿瘤植入后第二天(第0天)开始治疗。 HKI-272在0.5%甲基纤维素-0.4%聚山梨醇酯-80(吐温80)中配制,并通过管饲法每日口服施用。每7天测定肿瘤质量[(长度×宽度2)/ 2]。除3T3 / neu外,所有异种移植研究中的肿瘤生长表示为相对肿瘤生长:第0天平均肿瘤质量与平均肿瘤质量的比率。相对于载体处理的对照计算肿瘤生长的抑制。在数据的对数转换后使用单尾学生t检验(等方差)证明抑制的统计显着性。
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参考文献 |
[1]. Rabindran SK, et al. Antitumor activity of HKI-272, an orally active, irreversible inhibitor of the HER-2 tyrosine kinase. Cancer Res, 2004, 64(11), 3958-3965. [2]. Yoshioka T, et al. Antitumor activity of pan-HER inhibitors in HER2-positive gastric cancer. Cancer Sci. 2018 Apr;109(4):1166-1176.
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