| 描述 |
AZD1208 hydrochloride 是一种新颖的,可口服的,具有高度选择性的 PIM 抑制剂。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
PIM[1]
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| 体外研究 |
AZD1208盐酸盐在巨核细胞白血病细胞系MOLM-16中显示出良好的抗增殖活性,GI50值小于100 nM [1]。 AZD1208盐酸盐(10μM)抑制Ramos细胞的生长,并且在1μM时,强烈抑制1μM的所有细胞中的PIM激酶。 AZD1208盐酸盐诱导细胞凋亡,PIM2敲低主要与细胞周期的改变有关[2]。 AZD1208盐酸盐和AZD2014的组合通过AML细胞中的mTORC1/2信号传导快速激活AMPKα,AMPKα是翻译机制的负调节物;深刻抑制AKT和4EBP1的激活;并抑制多核糖体的形成[3]。
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| 激酶实验 |
使用读数器上的迁移率变动测定法测定底物FL-Ahx-Bad上纯化的人PIM-1，PIM-2和PIM-3酶的活性。 PIM-1测定在12 mL反应中进行，该反应含有50 mM HEPES（pH 7.5），1 mM DTT，0.01％Tween 20,50 mg / mL BSA，10 mM MgCl 2,1.5 mM FL-Ahx-Bad肽，100 mM ATP，2.5 nM PIM-1和各种量的抑制剂。在25℃温育90分钟后，用5mL由100mM HEPES，121mM EDTA，0.8％涂层试剂3和0.01％吐温20组成的终止混合物淬灭反应.PET-2测定的ATP和酶浓度分别为5mM和2.5nM，而50mM的ATP和0.33nM的酶用于PIM-3测定。对于高[ATP]筛选，对于PIM-1和PIM-2或0.11nM PIM-3，使用5mM ATP和0.67nM酶。检测磷酸化和未磷酸化底物的荧光，并计算比率值以确定转化百分比。 IC50值使用软件[1]从剂量反应数据确定。
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| 细胞实验 |
将购自DSMZ并在含有10％胎牛血清（FBS）和1％L-谷氨酰胺的RPMI中培养的MOLM-16细胞以每孔20,000个细胞接种于96孔板中过夜。用化合物（包括AZD1208盐酸盐）或对照载体（二甲基亚砜）处理细胞72小时，并在37℃加入Cell Titer-Blue 4小时后测量细胞活力，并在TecanInfinite®200上读取荧光。通过计算每种剂量相对于载体处理细胞的生长和处理时细胞活力来确定GI50 [1]。
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| 参考文献 |
[1]. Dakin LA, et al. Discovery of novel benzylidene-1,3-thiazolidine-2,4-diones as potent and selective inhibitors of the PIM-1, PIM-2, and PIM-3 protein kinases. Bioorg Med Chem Lett. 2012 Jul 15;22(14):4599-604. [2]. Kreuz S, et al. Loss of PIM2 enhances the anti-proliferative effect of the pan-PIM kinase inhibitor AZD1208 in non-Hodgkin lymphomas. Mol Cancer. 2015 Dec 8;14:205. [3]. Harada M, et al. The novel combination of dual mTOR inhibitor AZD2014 and pan-PIM inhibitor AZD1208 inhibits growth in acute myeloid leukemia via HSF pathway suppression. Oncotarget. 2015 Nov 10;6(35):37930-47.
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