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Torin 1

Torin 1用途

Torin 1 是一种有效的 mTOR 抑制剂,IC50 为 3 nM。Torin 1 抑制 mTORC1/2 复合物,IC50 值在 2 和 10 nM 之间。

Torin 1名称

[ CAS 号 ]:
1222998-36-8

[ 中文名 ]:
N-3-吡啶-4-[[3-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶]氧基]苯基]甲基]-1-哌啶羧酰胺

[ 英文名 ]:
Torin 1

[英文别名 ]:

Torin 1
Torin1

Torin 1生物活性

[ 描述 ]:

Torin 1 是一种有效的 mTOR 抑制剂,IC50 为 3 nM。Torin 1 抑制 mTORC1/2 复合物,IC50 值在 2 和 10 nM 之间。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 自噬 >> 自噬

信号通路 >> PI3K/Akt/mTOR 信号通路 >> mTOR

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

mTORC1:2-10 nM (IC50)

mTORC2:2-10 nM (IC50)

mTOR:3 nM (IC50)

DNA-PK:1 μM (IC50)

PI3K-α:1.8 μM (IC50)

ATM:0.6 μM (IC50)

hVps34:3 μM (IC50)

Autophagy

[体外研究]

Torin1(250 nM)完全抑制增殖并导致G1/S细胞周期停滞,并且在野生型MEF中比50nM雷帕霉素更大程度地降低细胞大小[1]。 Torin1在mTOR和PI3Kis之间的选择性超过800倍,并且相对于其他PIKK家族激酶具有非常高的选择性,但DNA-PK除外[2]。

[体内研究]

Torin1(20mg/kg,ip)在U87MG异种移植模型中是有效的,并且对肿瘤和外周组织中mTOR的下游效应物表现出良好的药效学抑制[2]。

[激酶实验]

为了产生可溶性mTORC1，产生HEK-293T细胞系，其使用水疱性口炎病毒G-假型MSCV逆转录病毒稳定表达N末端FLAG标记的Raptor。对于mTORC2，产生HeLa细胞，其稳定表达N末端FLAG标记的Protor-1。通过在50mM HEPES，pH7.4,10mM焦磷酸钠，10mMβ-甘油磷酸钠，100mM NaCl，2mM EDTA，0.3％CHAPS中裂解细胞来纯化两种复合物。将细胞在4℃下裂解30分钟，并通过在13,000rpm下微量离心10分钟除去不溶性级分。将上清液与FLAG-M2单克隆抗体 - 琼脂糖一起温育1小时，然后用裂解缓冲液洗涤三次，用含有终浓度0.5mol / L NaCl的裂解缓冲液洗涤一次。用50mM HEPES，pH 7.4,100mM NaCl中的100μg/ mL 3×FLAG肽洗脱纯化的mTORC1。可以将洗脱液等分并储存在-80℃。激酶测定在30°C下进行20分钟，最终体积为20μL，由激酶缓冲液（25 mM HEPES，pH 7.4,50 mM KCl，10 mM MgCl2,500μMATP）和150 ng无活性S6K1组成或Akt1作为底物。加入80μL样品缓冲液终止反应，煮沸5分钟。随后通过SDS-PAGE和免疫印迹分析样品。

[细胞实验]

在第0天，将96孔板接种每孔500个细胞并生长过夜。在第1天，用合适的化合物处理细胞，随后在第3-5天进行分析。为了分析，将板在室温下孵育60分钟;向每个孔中加入50μLCellTiter-Glo试剂，并将平板在轨道振荡器上混合12分钟。在标准板发光计上量化发光。

[动物实验]

对于药效学实验，首先将torin 1粉末以25mg / mL溶解在100％N-甲基-2-吡咯烷酮中，然后在注射前用无菌50％PEG400以1：4稀释。在药物治疗之前，将6周龄雄性C57BL / 6小鼠禁食过夜。通过IP注射用载体（10小时）或26小鼠（20mg / kg，2小时，6小时或10小时）处理小鼠，然后在处死前1小时再处理（CO 2窒息）。收集组织并在干冰上冷冻。将冷冻组织在冰上解冻，并在组织裂解缓冲液（50mM HEPES，pH 7.4,40mM NaCl，2mM EDTA，1.5mM原钒酸钠，50mM氟化钠，10mM焦磷酸钠，10mM钠β）中超声处理裂解。 - 甘油磷酸盐，0.1％SDS，1.0％脱氧胆酸钠和1.0％Triton，补充有蛋白酶抑制剂混合物片剂）。使用Bradford测定法测量澄清裂解物的浓度，随后通过蛋白质含量标准化样品并通过SDS-PAGE和免疫印迹分析。

[参考文献]

[1]. Thoreen CC, et al, An ATP-competitive mammalian target of rapamycin inhibitor reveals rapamycin-resistant functions of mTORC1. J Biol Chem, 2009, 284(12), 8023-8032.

[2]. Liu Q, et al. Discovery of 1-(4-(4-propionylpiperazin-1-yl)-3-(trifluoromethyl)phenyl)-9-(quinolin-3-yl)benzo[h][1,6]naphthyridin-2(1H)-one as a highly potent, selective mammalian target of rapamycin (mTOR) inhibitor for the treatment of cancer. J Med Chem. 2010 Oct 14;53(19):7146-55.

[3]. Bi C, et al. Inhibition of 4EBP phosphorylation mediates the cytotoxic effect of mechanistic target of rapamycin kinase inhibitors in aggressive B-cell lymphomas. Haematologica. 2017 Apr;102(4):755-764.

[4]. Brandt M, et al. mTORC1 Inactivation Promotes Colitis-Induced Colorectal Cancer but Protects from APC Loss-Dependent Tumorigenesis. Cell Metab. 2018 Jan 9;27(1):118-135.e8.

[相关活性小分子]

Torin 1物理化学性质

[ 密度 ]:
1.4±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
817.2±65.0 °C at 760 mmHg

[ 分子式 ]:
C₃₅H₂₈F₃N₅O₂

[ 分子量 ]:
607.624

[ 闪点 ]:
448.0±34.3 °C

[ 精确质量 ]:
607.219482

[ PSA ]:
71.33000

[ LogP ]:
5.26

[ 外观性状 ]:
light yellow solid

[ 蒸汽压 ]:
0.0±2.9 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.663

[ 储存条件 ]:
-20℃

Torin 1安全信息

[ 安全声明 (欧洲) ]:
24/25

[ 海关编码 ]:
29334900