[罗米地辛] - 作用 - 生物活性 - 靶点活性

发布时间:2018-12-14 20:33:30 编辑作者:活性达人

罗米地辛图片

图片:罗米地辛结构式

罗米地辛,英文名Romidepsin,CAS号是128517-07-7,别名FK 228。它是一种静脉注射的组蛋白去乙酰化酶抑制剂和抗肿瘤剂,可用于难治性或复发性皮肤和外周T细胞淋巴瘤。那么它的生物活性是什么?如何做实验呢?下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍罗米地辛的生物活性:

1)体外活性
罗米地辛有效抑制HDAC1和HDAC2(IC50 = 36,47 nM,分别)。罗米地辛对HDAC4和HDAC6具有轻微抑制作用(IC50 = 510,14000nM)。罗米地辛诱导组蛋白乙酰化和p21表达,EC50为3.0 nM。由于redFK在HeLa细胞中的不稳定性,罗米地辛比redFK更强,EC50为11 nM [1]。罗米地辛的效力是TSA的100倍,在抑制A549细胞增殖方面比丁酸盐的效力高1,000,000倍。罗米地辛导致有丝分裂停滞,HDI治疗导致有丝分裂染色体分离缺陷[2]。罗米地辛抑制U-937,K562和CCRF-CEM细胞的生长,IC50值分别为5.92 nM,8.36 nM和6.95 nM [3]。

2)体内活性
在scid小鼠淋巴瘤模型中,罗米地辛治疗小鼠每周一次或两次比对照小鼠存活时间更长,中位生存时间分别为30.5(0.56 mg / kg)和33天(0.32 mg / kg)(相对于20天) 控制小鼠)。值得注意的是,用罗米地辛治疗的12只小鼠中有2只(0.56mg / kg,每周一次或两次)在60天的观察期后存活。在用罗米地辛处理48小时后,U-937细胞的凋亡群体以时间依赖性方式增加至37.7%。此外,罗米地辛诱导G1和G2 / M阻滞以及U-937细胞向CD11b(+)/ CD14(+)表型的分化。在用罗米地辛处理24小时后,p21(WAF1 / Cip1)和凝溶胶蛋白mRNA的表达分别增加至654倍和152倍。罗米地辛在p21(WAF1 / Cip1)启动子区域引起组蛋白乙酰化,包括Sp1结合位点[3]。

我们已经了解了罗米地辛的生物活性,接下来如何做活性实验呢?一般来说,有如下的三种方法:

1)细胞实验
将细胞在96孔板中暴露于各种浓度的罗米地辛72小时。向每个孔中加入20μL5mg/ mL MTT的PBS溶液4小时。除去培养基后,向各孔中加入170μLDMSO以溶解甲crystals晶体。测定540nm处的吸光度。另外,将细胞与台盼蓝一起孵育,并在血细胞计数器中计数蓝色(死亡)细胞和透明(活)细胞的数量。对于细胞周期分析,将细胞在含有0.05mg / mL碘化丙啶,1mM EDTA,0.1%Triton X-100和1mg / mL RNase A的PBS中的碘化丙锭染色溶液中孵育30分钟。然后使悬浮液通过尼龙筛网过滤器并在Becton Dickinson FACScan上分析。

2)动物实验
简而言之,男性scidmice注射i.p. 用150mg / kg环磷酰胺。所有注射环磷酰胺的小鼠仅在观察期内存活。环磷酰胺注射后24小时,接种小鼠腹腔注射。在500μLPBS中使用1×107U-937细胞。在肿瘤细胞接种后24小时,对小鼠进行腹膜内注射治疗。含或不含FK228,剂量范围为0.1至1毫克/千克,每周一次或两次。对照小鼠每周两次用10%HCO60盐水处理。六只和十二只小鼠分别用于FK228处理组和对照组。观察期为细胞接种后60天,通过存活时间评估抗肿瘤效果,通过Peto检验分析其统计学显着性。

3)激酶实验
对于酶测定,将10μL[3H]乙酰基标记的组蛋白(25,000cpm /10μg)加入到90μL从过量表达HDAC1或HDAC2的293T细胞中提取的HDAC酶级分中,在增加浓度的罗米地辛存在下,和 将混合物在37℃下温育15分钟。酶反应是线性的至少1小时。加入10μL浓HCl终止反应。用1mL乙酸乙酯萃取释放的[3H]乙酸,并将0.9mL溶剂层加入5mL含水计数闪烁液II水溶液中以测定放射性。IC50值由至少三个独立的剂量 - 反应曲线确定。

今天介绍了罗米地辛的作用,并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述,罗米地辛罗米地辛是一种有效的HDAC1和HDAC2抑制剂,IC50值分别为36 nM和47 nM。它的靶点活性是HDAC1,36nM;HDAC2,47nM。

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参考文献:
[1]. Furumai R, et al. FK228 (depsipeptide) as a natural prodrug that inhibits class I histone deacetylases. Cancer Res. 2002 Sep 1;62(17):4916-21.
[2]. Blagosklonny MV, et al. Histone deacetylase inhibitors all induce p21 but differentially cause tubulin acetylation, mitotic arrest, and cytotoxicity. Mol Cancer Ther. 2002 Sep;1(11):937-41.
[3]. Sasakawa Y, et al. Effects of FK228, a novel histone deacetylase inhibitor, on human lymphoma U-937 cells in vitro and in vivo. Biochem Pharmacol. 2002 Oct 1;64(7):1079-90.

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