[ACY-1215] - 作用 - 生物活性 - 靶点活性

发布时间:2018-12-14 20:55:30 编辑作者:活性达人

ACY-1215图片

图片:ACY-1215结构式

ACY-1215,英文名Ricolinostat。它是一种口服生物可利用的组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)特异性抑制剂,具有潜在的抗肿瘤活性。那么它的生物活性是什么?如何做实验呢?下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍ACY-1215的生物活性:

1)体外活性
ACY-1215对HDAC8具有轻微活性(IC50 =0.1μM),对HDAC4,HDAC5,HDAC7,HDAC9,HDAC11,Sirtuin1和Sirtuin2的活性(IC50>1μM)最小。使用MM细胞系通过MTT测定确定ACY-1215对多发性骨髓瘤(MM)细胞活力的影响。MM细胞系暴露48小时导致剂量依赖性降低的活力,IC 50值范围为2-8μM。ACY-1215在MM Bortezomib抗性细胞系(ANBL-6BR)中显示出显着活性,证明了ACY-1215克服硼替佐米抗性的能力[1]。

2)体内活性
用ACY-1215,硼替佐米或ACY-1215加硼替佐米治疗的小鼠显示出肿瘤生长的显着延迟(分别为P = 0.01,P = 0.006和P <0.0001)。与对照组(对照组17天,联合治疗组40天,P <0.0001)和硼替佐米相比,ACY-1215和硼替佐米联合治疗显示肿瘤生长显着抑制并显着延长总生存期(OS) - 治疗组(Bortezomib组22天,联合治疗组40天,P <0.0001)。与治疗期间的当天对照组相比,联合治疗组的体重减轻在4%至12%之间,在最后一次注射后完全恢复。正如在浆细胞瘤模型中观察到的,通过将ACY-1215与硼替佐米相比,与单独的任一种药物相比,发现了显着的治疗优势[1]。

我们已经了解了ACY-1215的生物活性,接下来如何做活性实验呢?一般来说,有如下的三种方法:

1)细胞实验
通过测量MTT染料吸光度来评估ACY-1215与或不与硼替佐米对MM细胞系,患者MM细胞和PBMC的生存力的影响。分离来自健康供体的PBMC,并在浓度增加的ACY-1215存在下用2.5μg/ mL植物血凝素(PHA)刺激48小时。通过氚标记的胸苷摄取来测量DNA合成。使用Rosette Sep阴性选择试剂盒从人血液中纯化CD4 + T细胞。在化合物存在下,CD3 / CD28 Dynabeads刺激细胞7天。使用alamarBlue评估细胞活力。将MM细胞(2-3×104个细胞/孔)在具有中等和不同浓度的ACY-1215,硼替佐米和/或重组IL-6(10ng / mL)或胰岛素样生长的96孔培养板中孵育。因子-1(IGF-1; 50ng / mL)在37℃下24小时,并测量氚标记的胸苷掺入[1]。

2)动物实验
小鼠[1]-为了评估ACY-1215的体内抗MM活性,将雄性SCID小鼠皮下接种在100μL无血清RPMI 1640培养基中的5×106MM.1S细胞。当肿瘤可测量时,小鼠用ACY-1215 50mg / kg IP溶于10%DMSO的5%葡萄糖水溶液中连续处理5天,持续3周; 硼替佐米0.5mg / kg每两周一次(IV)溶解于0.9%盐水溶液中连续3周; 或与用于个体药剂的相同给药方案组合。对照组仅以与组合组相同的时间表接收承运人。使用卡尺每隔一天在2维测量肿瘤大小,并且用以下公式计算肿瘤体积:V = 0.5(a×b2)其中a是肿瘤的长直径,b是肿瘤的短直径。当肿瘤达到2cm 3或溃疡时,小鼠被杀死。从治疗的第一天到死亡评估存活和肿瘤生长。

3)激酶实验
将ACY-1215溶解,随后在测定缓冲液[50mM HEPES,pH 7.4,100mM KCl,0.001%Tween-20,0.05%BSA和20μM三(2-羧乙基)膦]中稀释至最终的6倍的浓度。将HDAC酶稀释至测定缓冲液中终浓度的1.5倍,并与ACY-1215预温育10分钟,然后加入底物。用于每种酶的FTS(HDAC1,HDAC2,HDAC3和HDAC6)或MAZ-1675(HDAC4,HDAC5,HDAC7,HDAC8和HDAC9)的量等于通过滴定曲线确定的米氏常数(Km)。用0.3μM测序级胰蛋白酶将FTS或MAZ-1675在测定缓冲液中稀释至最终浓度的6倍。将底物/胰蛋白酶混合物加入酶/化合物混合物中,摇动板60秒,然后置于SpectraMax M5微量滴定板读数器中。在肽底物中赖氨酸侧链脱乙酰化后,在30分钟内监测酶促反应释放7-氨基-4-甲氧基 - 香豆素,并计算反应的线性速率[1]。

今天介绍了ACY-1215的作用,并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述,ACY-1215 是一种有效,选择性的 HDAC6 抑制剂,IC50 为 5 nM。ACY-1215也可抑制HDAC1,HDAC2和HDAC3,IC50分别为58,48和51 nM。它的靶点活性是HDAC1,58nM;HDAC2,48nM;HDAC3,51nM;HDAC6,4.7nM;HDAC8,100nM。

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参考文献:
[1]. Santo L, et al. Preclinical activity, pharmacodynamic, and pharmacokinetic properties of a selective HDAC6 inhibitor, ACY-1215, in combination with bortezomib in multiple myeloma. Blood. 2012 Mar 15;119(11):2579-89.

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