雷公藤甲素的作用 - 生物活性 - 靶点活性

雷公藤甲素，英文名Triptolide，CAS号38748-32-2，它是从雷公藤根中提取的二萜类三环氧化物，具有免疫抑制，抗炎和抗增殖作用。 雷公藤甲素是NF-κB 活化的抑制剂。雷公藤甲素是一种热休克因子 (HSF1) 抑制剂，抑制 HSP90-CDC37 结合，且诱导 HSP90 乙酰化，也抑制 MDM2 表达，这种作用具有剂量依赖性，IC50 范围为 47 到 73 nM。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍雷公藤甲素的生物活性：

1）体外活性
雷公藤甲素醇诱导培养的和原发性慢性淋巴细胞白血病（CLL）B细胞凋亡。用雷公藤甲素醇处理CD19 + B细胞诱导培养的和原代CLL细胞中细胞凋亡的剂量依赖性增加。雷公藤甲素对高风险（n = 5）和低风险CLL（n = 12）B细胞（10至50nM范围）具有选择性毒性，同时大部分保留正常B细胞​​（n = 5）。与热休克诱导的HSP转录的抑制一致，雷公藤甲素醇治疗可减轻热休克诱导的HSPs表达[1]。

雷公藤甲素是一种来自中国植物雷公藤（Tripterygium wilfordii）的天然产物，据报道其在广泛的癌症中具有抗肿瘤作用。雷公藤甲素以剂量依赖性方式抑制MDM2表达，即使在急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞中跨越20-100nM的低浓度也是如此。雷公藤甲素在具有天然MDM2过表达的所有8种细胞系中表现出强烈的细胞毒活性，IC50值范围为47至73nM。

雷公藤甲素对表达非常低水平的MDM2的EU-4细胞表现出更低的细胞毒性作用，而当MDM2稳定转染时它有效地杀死这些细胞（IC50值：725nM对88nM）[2]。将分化的PC12细胞与不同浓度的雷公藤甲素（0.01,0.1和1nM）在10μMAβ25-35存在下孵育24小时，并使用MTT测定法检测雷公藤甲素醇的作用。结果显示Aβ25-35可降低细胞活力，当用雷公藤甲素醇处理时，分化的PC12细胞的活力显着增加。结果表明，雷公藤甲素可以减轻Aβ25-35引起的细胞损伤，这意味着雷公藤甲素具有神经保护作用[3]。

2）体内活性
接受静脉内剂量后，雷公藤甲素（TP）血浆浓度在小鼠中迅速下降。注射2小时后，雷公藤甲素浓度降至低于所有三组的定量下限。在对照组和治疗组之间进行参数比较，以评估P-gp抑制对雷公藤甲素醇暴露和消除的影响。用mdr1a-siRNA处理可显着增强雷公藤甲素血浆暴露，Cmax从413±74增加到510±94 ng / mL（P <0.05），AUC从103.5±9.6增加到154.3±30.2 ng•h / mL （P <0.05）。

在伴随Tariquidar的组中，AUC显着增加，从对照的103.5±9.6到雷公藤甲素+ Tariquidar组的145.9±24.6ng•h / mL（P <0.05）。因此，小鼠雷公藤甲素的总体清除率显着下降，从对照的9564±1024.2 mL / min / kg降至6576.4±1438.5（P <0.05）和5755.4±1200.1 mL / min / kg（P <0.05）。雷公藤甲素+ Tariquidar和Triptolide + mdr1a-siRNA组分别为[4]。

我们已经了解了雷公藤甲素的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的两种方法：

1）细胞实验
用不同浓度的雷公藤甲素醇处理分化的PC12细胞的活力。在分化的PC12细胞在含有RPMI 1640培养基的96孔板上培养以稳定后，将分化的PC12细胞与不同浓度的雷公藤甲素（0.01,0.1和1nM）一起温育24小时。 选择本研究中的浓度。然后通过MTT测定确定细胞活力。每个条件和实验重复三次[3]。

2）动物实验
小鼠[4]-使用雄性BALB / C小鼠（重量，18-22g）。对雷公藤甲素醇（TP）血浆动力学研究和毒理学评价，将小鼠分为4组（每组n = 5），采集血液和组织样本：（1）正常+生理盐水组; （2）1.0mg / kg雷公藤甲素+ 15nmol阴性对照（NC）siRNA-siRNA组; （3）1.0 mg / kg雷公藤甲素醇+ 15 nmol mdr1a-siRNA组; （4）1.0 mg / kg雷公藤甲素+ 10 mg / kg Tariquidar组。

为了避免由药物吸收或可能的肠道首过效应引起的并发症，将雷公藤甲素和抑制剂静脉内给予小鼠。在雷公藤甲素剂量给药前2天，siRNA组静脉内注射NC-siRNA或mdr1a-siRNA。对于雷公藤甲素+ Tariquidar组，在注射雷公藤甲素前20分钟给小鼠静脉注射Tariquidar剂量。在雷公藤甲素给药后2,5,10,15,30,60和120分钟收集血样。为了评估雷公藤甲素的肝脏暴露，在给药后5,30,60和120分钟从另一组小鼠收集肝组织样品。

本实验设计了三个雷公藤甲素醇组，包括Triptolide + NC-siRNA组，Triptolide + mdr1a-siRNA组和Triptolide + Tariquidar组。称重肝组织样品，然后在10体积（w：v）的冰冷盐水中匀浆。通过验证的LC-MS / MS方法测量血浆和肝组织中雷公藤甲素的浓度。

今天介绍了雷公藤甲素的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，雷公藤甲素是一种三萜类化合物，是一种从中草药雷公藤中提取的免疫抑制剂。它的靶点活性是heat shock factor (HSF1)( in ALL cell lines), Mdm2,47to73nM。

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参考文献：
[1]. Ganguly S, et al. Targeting HSF1 disrupts HSP90 chaperone function in chronic lymphocytic leukemia. Oncotarget. 2015 Oct 13;6(31):31767-79.
[2]. Huang M, et al. Triptolide inhibits MDM2 and induces apoptosis in acute lymphoblastic leukemia cells through a p53-independent pathway. Mol Cancer Ther. 2013 Feb;12(2):184-94.
[3]. Xu P, et al. Triptolide Inhibited Cytotoxicity of Differentiated PC12 Cells Induced by Amyloid-Beta25-35 via the Autophagy Pathway. PLoS One. 2015 Nov 10;10(11):e0142719.
[4]. Kong LL, et al. Inhibition of P-glycoprotein Gene Expression and Function Enhances Triptolide-induced Hepatotoxicity in Mice. Sci Rep. 2015 Jul 2;5:11747.
[5]. Zhang W, et al. Triptolide Combined with Radiotherapy for the Treatment of Nasopharyngeal Carcinoma via NF-κB-Related Mechanism. Int J Mol Sci. 2016 Dec 19;17(12). pii: E2139.