鞣花酸的作用 - 生物活性 - 靶点活性

鞣花酸，英文名是Ellagic acid，从桉树（Eucalyptus maculata Hook）和E. Hemipholia F. Muell的kino中分离的融合的四环化合物。 激活血液凝固系统的因子XII，其也引起激肽释放; 用于研究和染料。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍鞣花酸的生物活性：

1）体外活性
鞣花酸是一种有效的CK2抑制剂，IC50为40 nM，Ki为20 nM。鞣花酸还可以阻断其他激酶，如LYN，PKA，SYK，GSK3，FGR和CK1，IC50分别为2.9,3.5,4.3,7.5,9.4和13.0μM，对DYRK1a，CSK，NPM-没有明显影响。ALK，RET和FLT3（IC50>40μM）。 鞣花酸（5-100μM）显示出对Karpas299，SUDHL1，SR786和FE-PD细胞系的抑制活性[1]。

鞣花酸（10μM）在辐射处理后对MCF-7细胞显示出细胞毒性作用。鞣花酸（10μM）与辐射（IR）组合显着地削弱了MCF-7细胞形成集落的能力，等同于单独处理。具有IR的鞣花酸还诱导细胞凋亡，并促进前凋亡Bax的上调和Bcl-2在MCF-7细胞中的下调[3]。

2）体内活性
鞣花酸（EA; 10mg / kg /天; p.o.，14天）使MDA脑含量大幅降低17％，并使大鼠中TNF-α水平降低42％。鞣花酸显着增加5-HT（39％），多巴胺（DA，71％）和去甲肾上腺素（NE，77％）的脑内容物减少。鞣花酸（10 mg / kg，p.o。，14天）导致大鼠中阿霉素诱导的组织病理学改变减少[2]。

我们已经了解了鞣花酸的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）动物实验
将50只雄性成年Sprague-Dawley大鼠随机分成如下五组：组（1）口服玉米油作为载体并用作正常对照。 组（2）每周两次接受多柔比星（DOX）注射（5mg / kg，腹膜内注射），持续14天。 组（3）接受鞣花酸（10mg / kg，口服;每日）14天，DOX（5mg / kg，腹膜内注射），每周两次，持续14天。 组（4）每天两次接受迷迭香酸（RA; 75mg / kg，口服;每日）14天，并且DOX（5mg / kg，腹膜内注射）每周两次，持续14天。 组（5）接受鞣花酸（10mg / kg，po;每天），RA（75mg / kg，po;每天）14天，DOX注射（5mg / kg，ip），每周两次，持续14天[2]。

2）细胞实验
通过MTT测定法测量ALCL细胞活力。简而言之，在加入鞣花酸之前12小时将0.1×10 5个细胞接种到96孔微量培养板上。在存在或不存在药物（鞣花酸）的情况下，在标准组织培养条件下，将细胞在200μL完全RPMI-1640培养基中生长48小时。然后将20μLMTT溶液（5mg / mL）加入细胞悬浮液中4小时。将细胞内甲crystals晶体用150μLDMSO溶解，并且在分光光度计上在540nm处测量的光密度代表一式三份培养物的平均值（±SD）[1]。

3）激酶实验
CK2和CK1磷酸化测定在37℃下在增加量的每种抑制剂（鞣花酸）存在下进行，最终体积为25μL，含有50mM，Tris-HCl pH 7.5,100mM NaCl，12mM MgCl 2，除非另有说明，否则0.02mM [33P-ATP]（500-1000cpm / pmol）。 可磷酸化的底物分别是CK2和CK1的合成肽底物RRRADDSDDDDD（100μM）和RRKHAAIGDDDDAYSITA（200μM）。加入激酶后开始反应，10分钟后停止反应。在将等分试样点到磷酸纤维素滤膜上之前，加入5μL的0.5M正磷酸。 在放射性标记的样品的SDS-PAGE后，在75mM磷酸底物中洗涤滤膜。在肽RRRFRPASPLRGPPK上测定DYRK1A，并测定酪氨酸激酶活性[1]。

今天介绍了鞣花酸的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，鞣花酸Ellagic acid是一种天然的抗氧化剂，为有效的，ATP 竞争性的 CK2 抑制剂，IC50 和 Ki 值分别为 40 nM 和 20 nM。鞣花酸的靶点活性为Carbonic anhydrase,
CK2,PKA,PKC,Smoothened,Syk。

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参考文献：
[1]. Cozza G, et al. Identification of ellagic acid as potent inhibitor of protein kinase CK2: a successful example of a virtual screening application. J Med Chem. 2006 Apr 20;49(8):2363-6.
[2]. Rizk HA, et al. Prophylactic effects of ellagic acid and rosmarinic acid on doxorubicin-induced neurotoxicity in rats. J Biochem Mol Toxicol. 2017 Dec;31(12).
[3]. Ahire V, et al. Ellagic Acid Enhances Apoptotic Sensitivity of Breast Cancer Cells to γ-Radiation. Nutr Cancer. 2017 Aug-Sep;69(6):904-910.