福他替尼的作用 - 生物活性 - 靶点活性

福他替尼，英文名为Fostamatinib，也称为R788。其IC50为41nM，它是活性代谢物R406的前药，是Syk抑制剂。它对Lyn不起作用。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍福他替尼的生物活性：

1）体外活性
福他替尼(R788)是R406的亚甲基磷酸酯前药，其可以在体内快速转化为R406。R406（R788的体外活性形式）选择性抑制Syk依赖性信号传导，EC50值范围为33nM至171nM，比不同细胞中不依赖Syk的途径更有效[1]。R406抑制多种弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞系的细胞增殖，EC50值范围为0.8μM至8.1μM[2]。

R406处理不仅可以降低BLNK，Akt，糖原合成酶激酶-3（GSK-3），叉头盒O（FOXO）和ERK的基础磷酸化，不仅可以用于高水平的细胞（TCL-002），还可以降低磷酸化Syk水平低的细胞。此外，R406完全抑制TCL1白血病中抗IgM诱导的Bcr信号。尽管TCL1白血病中组成型活性Syk水平较高，但R406对白血病细胞没有选择性细胞毒性[3]。

2）体内活性
福他替尼(R788)在体内有效抑制BCR信号传导，导致恶性B细胞的增殖和存活减少，并显着延长治疗动物的存活[3]。在风湿性关节炎模型中，福他替尼明显减少炎症介质，比如TNFalpha，IL-1，IL-6和IL-18，从而减少炎症和骨退化。福他替尼能够有效抑制体内BCR信号，导致恶性B细胞的增殖和存活减少，并明显延长治疗组动物的存活。在逆转-被动阿瑟斯反应和双抗体诱导的关节炎小鼠模型中，口服福他替尼减少免疫复合物介导的炎症。

我们已经了解了福他替尼的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）动物实验
动物模型：伴有关节炎的Balb/c小鼠

2）细胞实验
培养的人肥大细胞（CHMC）来自脐带血CD34+祖细胞并生长，引发和刺激并显示在补充数据中。在刺激之前，将细胞与R788或DMSO孵育30分钟。然后用0.25至2mg/mL抗IgE或抗IgG或2μM离子霉素刺激细胞。对于类胰蛋白酶测量，在改良的Tyrode缓冲液中刺激每孔~1500个细胞30分钟。对于LTC4和细胞因子产生，每孔100,000个细胞分别刺激1或7小时。通过肽底物的发光读数测量类胰蛋白酶活性，并使用Luminex多重技术测量LTC4和细胞因子。

3）激酶实验
荧光偏振激酶测定和Ki测定：进行荧光偏振反应。对于Ki测定，在DMSO或R788存在下，在125,62.5,31.25,15.5或7.8nM下，在200μM（2倍连续稀释）的8种不同ATP浓度下建立重复的200-μL反应。在不同的时间点，除去20μL的每个反应并淬灭以停止反应。对于R788的每个浓度，测定每种ATP浓度下的反应速率并相对于ATP浓度作图，以确定表观Km和Vmax（最大速率）。最后，将表观Km（或表观Ki/Vmax）相对于抑制剂浓度作图，以确定Ki。

今天介绍了福他替尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，福他替尼R788(Fostamatinib)是R406的活性代谢物的原药，是Syk抑制剂，IC50为41 nM。福他替尼的靶点活性为A3,81nM；Adenosine transporter,1.84μM；Monoamine transporter,2.74μM；Syk,41nM。

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参考文献：
1. Braselmann S, et al. J Pharmacol Exp Ther, 2006, 319(3), 998-1008.
2. Chen L et al.Blood, 2008, 111(4), 2230-2237.
3. Suljagic M, et al. Blood, 2010, 116(23), 4894-4905.
4. Bajpai M. IDrugs, 2009, 12(3), 174-185.