| 描述 |
PSI-7409 tetrasodium 是一种 sofosbuvir (PSI-7977) 的 5'-三磷酸活性代谢物,能够抑制 HCV NS5B polymerases,对 GT 1b_Con1,GT 2a_JFH1,GT 3a 和 GT 4a NS5B 聚合酶的 IC50 值分别为 1.6,2.8,0.7 和 2.6 μM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 1.6 μM (GT 1b_Con1), 2.8 μM (GT 2a_JFH1), 0.7 μM (GT 3a), 2.6 μM (GT 4a)[1]
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| 体外研究 |
PSI-7409四钠是活性5'-三磷酸代谢物,抑制HCV NS5B聚合酶,GT 1b_Con1,GT 2a_JFH1,GT 3a和GT 4a NS5B聚合酶的IC50分别为1.6,2.8,0.7和2.6μM。 PSI-7409也弱抑制人DNA聚合酶α,IC50为550μM,但对DNAPolβ和γ没有抑制作用[1]。在克隆A细胞中,PSI-7409的水平在48小时的时间内逐渐增加至约25μM的最大浓度。 PSI-7409在原代人肝细胞中以更快的速率形成,在4小时达到~100μM的最大细胞内浓度,并在该浓度下保持48小时[2]。
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| 激酶实验 |
在含有50mM Tris（pH 7.5），50mM NaCl，3mU /μL活化小牛胸腺DNA，20μM浓度的所有四种天然脱氧核苷三磷酸的10-μL反应混合物中测定人DNA聚合酶α，β或γ。 ，4μCi[α-32P] dCTP，5mM MgCl 2，和增加浓度的PSI-7409（至多1mM），D-ddFCTP或aphidicolin。将DNA聚合酶α，β或γ加入到反应混合物中，分别得到20,18和50μg/ mL的终浓度。所有反应均在37℃下进行，并通过与1μL0.5MEDTA混合在30分钟淬灭。放射性标记的产物被量化。执行非线性拟合以确定IC 50。 RNA聚合酶II的活性在含有100ng巨细胞病毒（CMV）立即早期启动子DNA，400μMATP，CTP和UTP，16μMGTP，10μCi[α-α]的25-μL体外转录反应混合物中测定。 32P] GTP，3 mM MgCl2和各种浓度的PSI-7409（最高1 mM），3'-dCTP或α-amanitin在转录缓冲液中（20 mM HEPES [pH 7.9]，100 mM KCl，0.2 mM EDTA ，0.5mM DTT和20％甘油）。所有反应均在30°C下进行，并在60分钟后通过与125μL终止溶液（0.3 M Tris-HCl [pH 7.4]，0.3 M乙酸钠，0.5％SDS，2 mM EDTA和3μg/ mL混合）淬灭的tRNA）。纯化RNA产物。所得样品含有12μL，并加入相同体积的凝胶上样染料（98％甲酰胺，10mM EDTA，0.1％二甲苯蓝和0.1％溴酚蓝）。将样品在90℃下加热5分钟并加载到6％聚丙烯酰胺测序凝胶上。运行后，将凝胶暴露于荧光屏，并使用磷成像仪对产品进行可视化和定量[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Lam AM, et al. PSI-7851, a pronucleotide of beta-D-2'-deoxy-2'-fluoro-2'-C-methyluridine monophosphate, is a potent and pan-genotype inhibitor of hepatitis C virus replication. Antimicrob Agents Chemother. 2010 Aug;54(8):3187-96. [2]. Murakami E, et al. Mechanism of activation of PSI-7851 and its diastereoisomer PSI-7977. J Biol Chem. 2010 Nov 5;285(45):34337-47.
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