(2E)-3-(6-溴-2-吡啶基)-2-氰基-N-[(1S)-1-苯基丁基]-2-丙烯酰胺

Degrasyn (WP1130) 是可渗透细胞的 去泛素化酶(DUB) 抑制剂,直接抑制USP9x,USP5,USP14和UCH37的DUB活性。 Degrasyn 减弱抗细胞凋亡蛋白 Bcr-Abl 和 JAK2。

信号通路 >> 自噬 >> 自噬

信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> BCR-ABL

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> 去泛素化酶

研究领域 >> 癌症

IC50: 1.8 μM (Bcr-Abl, in K562, BV-173 cells)[1] Deubiquitinase[2]

Degrasyn,一种小分子,特异性地快速下调野生型和突变型Bcr/Abl蛋白,而不影响慢性粒细胞白血病(CML)细胞中bcr/abl基因的表达。 Degrasyn比正常CD34 +造血前体,真皮成纤维细胞或内皮细胞(IC50~5-10μM)更有效诱导髓样和淋巴肿瘤细胞凋亡(IC50 0.5至2.5μM)。 Degrasyn通过一种独特的机制降低Bcr/Abl蛋白水平,该机制不受干扰甲磺酸伊马替尼结合的突变的影响。 Degrasyn抑制野生型和T315I突变体Bcr/Abl蛋白的磷酸化,如BV173和BV173R细胞中磷酸酪氨酰-Bcr/Abl的快速消失(1小时内)所证明。 Degrasyn诱导的Bcr/Abl下调伴随着CML细胞的凋亡[1]。用Degrasyn处理以剂量依赖性方式在所有测试的细胞系中产生抗增殖作用。值得注意的是,用Degrasyn治疗导致NCH644和NCH421K神经胶质瘤干细胞样细胞的显着抗增殖活性和形态学变化。用Degrasyn治疗导致6小时后Mcl-1 mRNA水平的剂量依赖性和可能的代偿性增加,并且在24小时后仅略微减少。对于Usp9X水平观察到类似的发现。这些数据表明Degrasyn通过转录后机制下调Mcl-1和Usp9X [2]。

Degrasyn抑制K562异种移植肿瘤的生长以及移植到裸鼠中的野生型Bcr/Abl和T315I突变体Bcr/Abl表达的BaF/3细胞的生长。为了评估Degrasyn对CML的可能的治疗活性,裸鼠接受K562细胞的皮下移植,并且在可触知的肿瘤形成(10天)后每隔一天用30mg/kg Degrasyn处理9天。该剂量和方案在其他肿瘤模型中具有良好的耐受性和有效性。将抗肿瘤活性与每日甲磺酸伊马替尼治疗(50mg/kg)后的抗肿瘤活性进行比较。肿瘤接种后19天,对照组肿瘤达到最大允许尺寸,评估治疗效果。 Degrasyn治疗抑制K562肿瘤生长至与甲磺酸伊马替尼治疗动物中观察到的程度相当的程度,表明Degrasyn在减少已建立的K562肿瘤的生长方面具有活性[1]。

将CML细胞接种在96孔板（2×10 4个细胞/孔）中，并在100μL培养基的最终体积中加入Degrasyn，甲磺酸伊马替尼或达沙替尼（0.08-10μM）。将平板在37℃温育72小时，然后加入20μLMTT试剂（原液5mg / mL），并将平板在37℃再温育2小时。用100μL裂解缓冲液（20％SDS的50％N，N-二甲基甲酰胺溶液，用80％乙酸和1M盐酸调节pH至4.7;乙酸的最终浓度为2.5％，盐酸为2.5％）裂解细胞。并孵育6小时。使用SPECTRA MAX M2读板仪测定每个样品在570nm处的光密度[1]。

小鼠[1]为了评估针对T315I Bcr / Abl突变细胞的活性，将用野生型Bcr / Abl或T315I突变体转染的BaF / 3细胞移植到雌性瑞士裸鼠（5-6周龄）中。将BaF / 3wt细胞悬浮于RPMI培养基中（5×10 7个细胞/ mL），并将0.1mL该悬浮液静脉内注射到10只小鼠中。使用相同的方法用BaF / 3 / T315I细胞接种10只小鼠。肿瘤细胞接种后一天，将小鼠随机分配到3组中的1组：每隔一天在50μLDMSO/ PEG300（载体）中接受Degrasyn（40mg / kg，腹膜内）（7次注射）;另一例在车辆中每天接受甲磺酸伊马替尼（100 mg / kg，腹腔注射）（14次注射）;每天第三次接受车辆（14次注射）。收集每只小鼠的脾脏，拍照，并在肿瘤细胞接种后15天称重。

[1]. Bartholomeusz GA, et al. Activation of a novel Bcr/Abl destruction pathway by WP1130 induces apoptosis of chronic myelogenous leukemia cells. Blood. 2007 Apr 15;109(8):3470-8.

BAY 11-7082 | 诺考达唑 | P005091 | 2,6-二氨基-3,5-二硫氰基吡啶 | 阿思尼布 | VLX1570 | 1-[5-[(2,4-二氟苯基)硫基]-4-硝基-2-噻吩基]乙酮 | 巴氟替尼 | N-[3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基]-N'-[2-氟-4-[(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基)氧]苯基]脲 | 的DUB-IN-2 | ML364 | (3E,5E)-3,5-二[(4-硝基苯基)亚甲基]-1-(1-氧代-2-丙烯-1-基)-4-哌啶酮 | GEN6776 | ML-323 | HBX 19818