N6-[2-[[4-(2,4-二氯苯基)-5-(1H-咪唑-1-基)-2-嘧啶基]氨基]乙基]-3-硝基-2,6-吡啶二胺

CHIR-98014 是一种有效的,细胞通透的 GSK-3 抑制剂,可抑制 GSK-3α 和 GSK-3β 的活性,IC50 值分别为 0.65 和 0.58 nM；CHIR-98014 对 cdc2 和 erk2 的作用较弱。

信号通路 >> PI3K/Akt/mTOR 信号通路 >> GSK-3

信号通路 >> 干细胞及 Wnt 通路 >> GSK-3

研究领域 >> 代谢疾病

GSK-3β:0.58 nM (IC50)

GSK-3α:0.65 nM (IC50)

cdc2:3700 nM (IC50)

CHIR 98014抑制人GSK-3β,Ki值为0.87 nM。 CHIR 98014在CHO-IR细胞和大鼠肝细胞中引起GS刺激,EC50分别为106 nM和107 nM [1]。 CHIR-98014(1μM)使ES-CCE细胞的活力降低52％,IC50为1.1μM。此外,CHIR-98014与CHIR-99021组合导致ES-D3细胞中Wnt /β-连环蛋白途径的显着活化。在CHIR-98014处理的细胞中,T基因表达被诱导高达2,500倍。 CHIR-98014(1μM)也产生约50％的Brachyury阳性细胞,EC50为0.32μM[2]。 CHIR98014(10μM)可防止皮质和海马神经元中20μMPrP1-30引起的神经突损失,并大大减少死细胞的数量[3]。

CHIR 98014(30 mg/kg,ip)在治疗4小时内显示出空腹高血糖显着降低,并且在显着糖尿病和胰岛素抵抗的db/db小鼠中ipGTT期间显示改善的葡萄糖处理[1]。

聚丙烯96孔板填充300μL/孔缓冲液（50mM tris HCl，10mM MgCl 2,1mM EGTA，1mM二硫苏糖醇，25mMβ-甘油磷酸盐，1mM NaF，0.01％BSA，pH 7.5），含有激酶，肽底物和任何激活剂。关于这些测定的激酶浓度，肽底物和活化剂的信息如下：GSK-3α（27nM，和0.5μM生物素-CRNB肽）; GSK-3β（29nM，和0.5μM生物素-CRNB肽）; cdc2（0.8nM，和0.5μM生物素组蛋白H1肽）; erk2（400单位/ mL，髓鞘碱性蛋白涂层Flash板）; PKC-α（1.6nM，0.5μM生物素 - 组蛋白H1肽，0.1mg / mL磷脂酰丝氨酸+0.01mg / mL甘油二酯）; PKC-ζ（0.1nM，0.5μM生物素-PKC-86肽，和50μg/ mL磷脂酰丝氨酸+5μg/ mL二酰基甘油）; akt1（5.55nM，和0.5μM生物素磷酸-AKT肽）; p70 S6激酶（1.5nM，和0.5μM生物素-GGGKRRRLASLRA）; p90 RSK2（0.049单位/ mL，和0.5μM生物素-GGGKRRRLASLRA）; c-src（4.1单位/ mL，和0.5μM生物素-KVEKIGEGTYGVVYK）; Tie2（1μg/ mL，和200nM生物素-GGGGAPEDLYKDFLT）; flt1（1.8nM，和0.25μMKDRY1175[B91616]生物素-GGGGQDGKDYIVLPI-NH2）; KDR（0.95nM，和0.25μMKDRY1175[B91616]生物素-GGGGQDGKDYIVLPI-NH2）; bFGF受体酪氨酸激酶（RTK; 2nM，和0.25μMKDRY1175[B91616]生物素-GGGGQDGKDYIVLPI-NH2）; IGF1 RTK（1.91nM，和1μM生物素-GGGGKKKSPGEYVNIEFG-酰胺）;胰岛素RTK（使用DG44 IR细胞）; AMP激酶（470单位/ mL，50μMSMSS肽和300μMAMP）; pdk1（0.25nM，2.9nM未活化的Akt，以及各20μM的DOPC和DOPS +2μMPIP3）; CHK1（1.4nM，和0.5μM生物素-cdc25肽）; CK1-ε（3nM，和0.2μM生物素 - 肽）; DNA PK（见31）;和磷脂酰肌醇（PI）3-激酶（5nM，和2μg/ mL PI）。将测试化合物或对照加入3.5μLDMSO中，然后加入50μLATP原液，在所有无细胞试验中产生1μMATP的终浓度。孵育后，将三份100μL等分试样转移至Combiplate八个含有100μL/孔50μMATP和20mM EDTA的平板。 1小时后，用PBS冲洗孔5次，填充200μL闪烁液，密封，放置30分钟，并在闪烁计数器中计数。所有步骤均在室温下进行。抑制计算为100％×（抑制 - 无酶对照）/（DMSO对照 - 无酶对照）[1]。

使用MTT测定法在暴露于不同浓度的GSK3抑制剂三天后测定小鼠ES细胞的存活力。 MTT活性的降低是一种可靠的基于代谢的测试，用于量化细胞活力;这种减少与细胞活力的丧失相关。将2,000个细胞在含有LIF的ES细胞培养基中的明胶包被的96孔板上接种过夜。第二天，将培养基更换为不含LIF且血清浓度降低的培养基，并补充0.1-1μMBIO，或1-10μMSB-216763，CHIR-99021或CHIR-98014。不含GSK3抑制剂或DMSO的基础培养基用作对照。所有测试条件一式三份进行分析[2]。

利多卡因麻醉的尖端通过浅尾剪切获得血液。直接测量血糖或收集肝素化血浆用于测量葡萄糖或胰岛素。将动物训练并随机分配至载体对照或GSK-3抑制剂治疗组。对于葡萄糖耐量试验（GTT），动物在整个过程中禁食，早晨清除，第一次出血前3小时（db / db小鼠），或前一天晚上，出血前16小时（ZDF大鼠）。当测量空腹ZDF大鼠的血浆葡萄糖和胰岛素变化的时间过程时，在施用测试剂之前约16小时去除食物。 GTT中的葡萄糖挑战是通过口服强饲法（oGTT）为1.35g / kg ip（ipGTT）或2g / kg。将测试抑制剂配制成20mM柠檬酸盐缓冲的15％Captisol溶液或0.5％羧甲基纤维素中的细悬浮液[1]。

[1]. Ring DB, et al. Selective glycogen synthase kinase 3 inhibitors potentiate insulin activation of glucose transport and utilization in vitro and in vivo. Diabetes. 2003 Mar;52(3):588-95.

[2]. Naujok O, et al. Cytotoxicity and activation of the Wnt/beta-catenin pathway in mouse embryonic stem cells treated with four GSK3 inhibitors. BMC Res Notes. 2014 Apr 29;7:273.

[3]. Zajkowski T, et al. Stabilization of microtubular cytoskeleton protects neurons from toxicity of N-terminal fragment of cytosolic prion protein. Biochim Biophys Acta. 2015 Oct;1853(10 Pt A):2228-39.

CHIR-99021 (CT99021) | SB 216763 | 3-[[6-(3-氨基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基]苯酚 | LY2090314 | 4-苄基-2-(萘-1-基)-[1,2,4]噻二唑烷-3,5-二酮 | GSK 3抑制剂IX | 肯帕罗酮 | N-(4-甲氧基苄基)-N'-(5-硝基-1,3-噻唑-2-基)脲 | 2-羟基-3-[5-(吗啉-4-甲基)吡啶-2-基]-1H-吲哚-5-甲腈 | 3-氨基-6-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基苯基]-n-吡啶-3-基吡嗪-2-羧酰胺 | 靛玉红-3'-单肟 | 3-[(3-氯-4-羟苯基)氨基]-4-(2-硝苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮 | 4-[(5-溴吡啶-2-基)氨基]-4-氧代丁酸 | RGB-286638自由基 | 4-苯甲基-2-甲基-1,2,4-噻二唑烷-3,5-二酮