TAK-659 hydrochloride_生物活性与实验方法

TAK-659 hydrochloride 是有效，选择性，有口服活性的脾脏酪氨酸激酶 (Syk) 抑制剂，IC50 值为 3.2 nM。

一、TAK-659 hydrochloride的生物活性：
1）体外活性
在广泛的激酶组中，TAK-659对SYK和FLT-3的选择性超过290种其他蛋白激酶。用TAK-659处理抑制共培养的原代CLL细胞和伯基特氏淋巴瘤细胞中的Syk活化和BCR信号传导。在悬浮培养的原代CLL细胞中，TAK-659处理导致BCR刺激后SykTyr525，Btk，NFκB，ERK1 / 2和STAT3的磷酸化的剂量依赖性降低。 TAK-659对Syk的抑制诱导CLL细胞凋亡并消除BCR和共培养衍生的存活信号。 TAK-659抑制原代CLL细胞中BMSC，CXCL12和CXCL13的趋化性，并消除微环境诱导的化学抗性。 TAK-659不抑制来自CLL患者的原代T细胞中TCR信号传导和T细胞活化的分子特征。在细胞增殖测定中，TAK-659显示对SYK依赖性细胞系（OCI-LY10）的抑制。对TAK-659的敏感性与影响B细胞淋巴瘤中SYK活性的突变相关，而TAK-659对粘附的原发性或实体肿瘤细胞系没有细胞毒性。在细胞活力测定中，TAK-659显示对FLT3-ITD依赖性细胞系MV4-11和MOLM-13敏感，而WT FLT3 RS4-11（ALL细胞系）和RA1（Burkitt淋巴瘤细胞系）不是对TAK-659敏感。在培养的人肿瘤细胞中，TAK-659有效抑制造血细胞系的生长，其浓度在敏感细胞系统中产生半数最大反应（EC50），范围为11至775 nM（例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤）和AML）。

2）体内活性
在FLT3依赖性MV4-11异种移植模型中，TAK-659在给药20天后显示每天60mg / kg的肿瘤消退。 初步血浆和尿液PK数据显示TAK-659被快速吸收（中位数Tmax 2-3小时），稳态暴露的中等变异性（DN-AUCtau为40-50％CV），平均峰值/谷值比为3.2 -4.2，并且在15天QD给药后平均累积2.1-2.6倍。 未改变药物的肾清除率（CLr）占表观口腔清除率的30-34％，表明对TAK-659全身清除的CLr贡献≥30-34％。 TAK-659在体内阻断抗IgD（免疫球蛋白D抗体）刺激小鼠外周B细胞中的CD86表达。

二、TAK-659 hydrochloride的实验方法：
1）细胞实验
FLT3依赖性细胞系（MV4-11和MOLM-13）将细胞维持在37℃，含有5-8％CO 2的潮湿气氛中。在一组血液学和实体瘤细胞系中，使用可溶性四唑盐MTS测定细胞活力的抑制。将细胞接种在96孔组织培养板中，并在37℃/ 5％CO 2下孵育24小时，然后加入化合物或DMSO载体。在与化合物一起温育72或96小时后，通过使用Thermomax酶标仪测量孔的OD490nm来确定代谢活性细胞的MTS转化。为了产生浓度 - 响应曲线，用一系列连续化合物稀释液一式两份处理细胞。在加入细胞之前，在DMSO中制备化合物稀释液。向细胞中加入等量的DMSO（终浓度为0.5％）。在针对DMSO处理的细胞进行背景校正和标准化后，通过使用非线性回归分析对这些细胞活力结果进行曲线拟合来计算EC 50值。

2）动物实验
动物模型：无胸腺裸鼠配方：0.5％羧甲基纤维素（CMC）剂量：10,30,60 mg / kg QD给药：口服强饲法（仅供参考）。

综上所述：
TAK-659是一种有效的选择性脾酪氨酸激酶（SYK）抑制剂，IC50值为3.2 nM。 它对大多数其他激酶具有选择性，但对SYK和FLT3均有效。它的靶点活性为FLT3,4.6nM；JAK3,114nM；Syk,3.2nM；VEGFR2,135nM；ZAP70,75nM。

参考文献：
[1]. Lam B, et al. Discovery of TAK-659 an orally available investigational inhibitor of Spleen Tyrosine Kinase (SYK). Bioorg Med Chem Lett. 2016 Dec 15;26(24):5947-5950.
[2]. Purroy N, et al. Inhibition of BCR signaling using the Syk inhibitor TAK-659 prevents stroma-mediated signaling in chronic lymphocytic leukemia cells. Oncotarget. 2017 Jan 3;8(1):742-756.