| 描述 |
Mc-MMAE 是保护基团 (马来酰亚氨基己酰) 共轭连接到单甲基 auristatin E (MMAE)。Mc-MMAE 是有效的微管蛋白抑制剂,是抗体偶联药物 (ADC) 中的毒性物质。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
Tubulin, Antibody-drug conjugates (ADC)[1]
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| 体外研究 |
马来酰亚胺己酰基-MMAE(mc-MMAE)的合成需要将马来酰亚胺己酸加入到MMAE在二氯甲烷中的溶液中,然后加入氰基膦酸二乙酯和二异丙基乙胺[1]。
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| 激酶实验 |
辣根过氧化物酶（HRP）用2-亚氨基四氢噻吩硫醇化并与mc-MMAE缀合以产生HRP-MMAE报告酶 - 药物缀合物。简言之，将含有0.2mM HRP（8mg / mL）和50mM 2-亚氨基硫杂环戊烷的25mM硼酸钠十水合物（Na 2 B 4 O 7·10H 2 O）缓冲液（pH 9.0）的硫醇化反应混合物在37℃温育1小时。通过在PBS（pH7.4）中平衡的PD-10脱盐柱除去未反应的2-亚氨基四氢噻吩。合并峰级分，并将mc-MMAE与摩尔比为3：1的硫醇化HRP（HRP-SH）偶联。最终的缀合反应混合物在硼酸钠缓冲液[50mM H3BO3,50mM NaCl（pH8.0）中含有80μMHRP-SH（3.2mg / mL）;在冰冷的CH 3 CN（20％v / v）中的80％v / v]和240μMmc-MMAE。在冰上30分钟后，在PD-10层析之前用20倍摩尔过量的游离半胱氨酸（4.8mM）终止反应。合并含有HRP-MMAE（交换到PBS）中的峰级分，并使用硫醇活性染料Alexa Fluor 594 C5马来酰亚胺[1]评估修饰程度。
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| 参考文献 |
[1]. Sanderson RJ, et al. In vivo drug-linker stability of an anti-CD30 dipeptide-linked auristatin immunoconjugate. Clin Cancer Res. 2005 Jan 15;11(2 Pt 1):843-52.
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