| 描述 |
HDAC6-IN-1 是一种有效的选择性 HDAC6 抑制剂,IC50 为 17 nM,比抑制 HDAC1 (IC50= 422 nM) 和 HDAC8 (IC50=3398 nM) 选择性分别高 25 倍和 200 倍。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 17 nM (HDAC6), 422 nM (HDAC1), 398 nM (HDAC8)[1]
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| 体外研究 |
HDAC6-IN-1(化合物23bb)对癌细胞系组具有低纳摩尔抗增殖作用。抗增殖活性是人恶性黑色素瘤A375细胞和宫颈癌HeLa细胞,HDAC6-IN-1分别显示最有效的活性,在A375和HeLa细胞上IC50值分别为50和49 nM。针对11种血液肿瘤(骨髓瘤U266,RPMI8226细胞,人白血病MV4-11,K562细胞和人B细胞淋巴瘤Ramos细胞)或实体瘤(卵巢癌A2780s,SKOV-3细胞,乳腺癌SKBR3细胞)的抗增殖活性,通过MTT评估HDAC6-IN-1的肝癌HepG2细胞,肺癌H460,A549细胞,宫颈癌HeLa细胞和结肠癌HCT116,HT29细胞系,并且SAHA和ACY-1215作为阳性对照。 HDAC6-IN-1显示出显着的抗增殖潜力,这些肿瘤细胞系的IC50值范围为14至104 nM [1]。
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| 体内研究 |
HDAC6-IN-1(化合物23bb)降低血液肿瘤MV4-11异种移植模型和实体瘤HCT116异种移植模型中的肿瘤生长。通过在MV4-11和HCT116异种移植物模型上以50mg/kg静脉内施用HDAC6-IN-1观察到显着的抗肿瘤活性。在静脉内施用50mg/kg的HDAC6-IN-1后,MV4-11和HCT116癌细胞异种移植物的生长被抑制了55.0％和76.3％(肿瘤质量变化[TGI]值的百分比)。还建立了HCT116异种移植模型以研究口服HDAC6-IN-1的抗肿瘤活性。在HCT116异种移植模型上口服HDAC6-IN-1(25mg/kg)的TGI值为60.4％,优于SAHA组(100mg/kg,59.2％)。另外,体重减轻是可接受的,并且在用HDAC6-IN-1治疗时没有观察到其他副作用。低清除率(CL = 7.008 L/kg每小时静脉注射,CL = 12.877 L/kg每小时po)和长终末半衰期(t1/2 =静脉注射7.658 h,po为t1/2 = 9.62 h)在HDAC6-IN-1中观察到。 HDAC6-IN-1的口服生物利用度在大鼠中是优异的,生物利用度高达47.0％[1]。
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| 激酶实验 |
使用4-氨基-7-甲基香豆素（AMC）标记的Ac-肽（Ac-肽-AMC）底物进行体外HDACs抑制测定。详细地说，在基质脱乙酰化后，胰蛋白酶的存在促进了AMC的释放。将稀释至指定浓度的化合物与全长重组HDAC酶，胰蛋白酶以及Ac-肽-AMC底物混合，并在室温下孵育1小时。用355nm波长的激发和460nm波长的发射测量荧光强度。通过与DMSO（媒介物）处理组[1]的比较来计算测试组的抑制率。
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| 细胞实验 |
在DMEM中培养A375，A2780s，SKBR3，HepG2，HeLa，HCT116，A549和SKOV-3细胞。 RPMI8226，K562，H460，HT29和Ramos细胞在RPMI-1640培养基中培养。 MV4-11细胞在IMDM中培养。所有培养基均含有10％胎牛血清（FBS），100单位/ mL青霉素和100μg/ mL链霉素。将细胞在37℃，5％CO 2的潮湿气氛中培养。将对数期细胞以每孔3000-5000个细胞的密度接种到96孔培养板中，随后用不同浓度的化合物（例如，HDAC6-IN-1; 10,100,1000和10000nM）处理72个细胞。 h的最终体积为200μL。在终点时，向每个孔中加入20μLMTT（5mg / mL），并将细胞再孵育1-3小时。小心地除去培养基后，通过机械振荡将沉淀物溶解在150μLDMSO中，然后在分光光度计上获取波长570nm的吸光度值。使用生长百分比与未处理对照[1]计算IC 50值。
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| 动物实验 |
小鼠[1]对于MV4-11和Ramos异种移植模型，将MV4-11和Ramos细胞（100μL无血清IMDM中的107个细胞）皮下注射到5-6周龄雌性NOD的右侧腹中。 / SCID小鼠。对于HCT116异种移植物，将HCT116细胞（100μL无血清DMEM中的107个细胞）皮下注射到5-6周龄雌性Balb / c裸鼠的右侧腹中。当形成的异种移植物的大小达到100-150mm 3时，将小鼠随机分成（MV4-11模型中每组6只小鼠，Ramos模型中每组8只小鼠，HCT116模型中每组7只小鼠）进入对照组和治疗组。实验组中的小鼠每2天接受静脉内（iv）注射（50mg / kg）或口服（25mg / kg）HDAC6-IN-1。载体组中的小鼠接受静脉注射或口服等量的含有5％乙醇和5％Cremophor EL的生理盐水。 SAHA或LBH-589或ACY-1215组（阳性对照组）接受ip注射（SAHA为50 mg / kg，LBH-589为10 mg / kg，溶于含10％DMSO和45％PEG400的生理盐水中）每2天浓度为10mg / mL）或口服给药（SAHA为100mg / kg，ACY-1215为40mg / kg，以上述相同方式溶解）。通过卡尺每2天测量肿瘤负荷。计算肿瘤体积（TV）。治疗开始的那天定义为第0天。在实验结束时，处死小鼠并收集肿瘤并称重[1]。将大鼠[1] HDAC6-IN-1以12mg / kg体重静脉内（iv）给予SD大鼠，并以12mg / kg体重口服给予。采集血样，使用LC-MS / MS系统分析血浆中HDAC6-IN-1的浓度[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Yang Z, et al. Discovery of Selective Histone Deacetylase 6 Inhibitors Using the Quinazoline as the Cap for the Treatment of Cancer. J Med Chem. 2016 Feb 25;59(4):1455-70.
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