描述 |
CCG215022 是一种G蛋白偶联受体激酶 (GRK) 抑制剂,作用于 GRK2,GRK5 和 GRK1,IC50 分别为 0.15±0.07 μM,0.38±0.06 μM 和 3.9±1 μM。
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相关类别 |
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靶点 |
IC50 & Target: 3.9±1.0 μM (GRK1), 0.15±0.07 μM (GRK2), 0.38±0.06 μM (GRK5), 120±40 μM (PKA)[1]
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体外研究 |
CCG215022对GRK2和GRK5均具有纳摩尔效力,并且比帕罗西汀的效力至少高20倍。在基于GRK2结构的药物设计活动过程中,CCG215022显示出针对GRK2和GRK5的纳摩尔IC50值以及对其他密切相关的激酶如GRK1和PKA的良好选择性。用CCG215022处理小鼠心肌细胞导致收缩性显着增加,浓度比帕罗西汀低20倍,帕罗西汀是一种抑制剂,对GRK2具有更适度的选择性[1]。
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激酶实验 |
将GRK5和尿素洗涤的牛杆外部区段(ROS)在黑暗中在含有20mM HEPES,pH 7.5,4mM MgCl 2和2mM EDTA的缓冲液中混合,并在室温下孵育35分钟。在反应开始前,通过加入ATP(含有[γ-32P] ATP)至终浓度为1mM,将反应混合物暴露于环境荧光下1分钟。 GRK5的最终浓度为100nM,ROS为0.75至24μM。在室温下开始反应,并在2-5分钟取样,然后用SDS-PAGE上样染料淬灭。使用SDS-PAGE分离蛋白质,干燥凝胶,并使用磷光体存储屏检测γ-32P的掺入。将0分钟的速率相对于ROS浓度作图,并使用Michaelis-Menten方程确定Vmax和Km值。将每条曲线的Vmax归一化为平行运行的GRK5561的Vmax。响应于200μMCCG215022的熔点测定在20mM HEPES,pH 7.0,5mM MgCl 2,2mM DTT,1mM CHAPS中进行,最终GRK5浓度为0.2mg / mL,使用100μM苯胺基萘-8-磺酸ThermoFluor读板器。在含有20mM HEPES,pH 8.0,200mM NaCl,2mM DTT,2.5mM MgCl 2和0.1mM苯胺基萘-8-磺酸(含或不含5mM ATP)的缓冲液中测定GRK5变体的熔点。这些测定的最终GRK5浓度为0.1 mg / mL [1]。
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参考文献 |
[1]. Homan KT, et al. Crystal Structure of G Protein-coupled Receptor Kinase 5 in Complex with a Rationally DesignedInhibitor. J Biol Chem. 2015 Aug 21;290(34):20649-59.
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