| 描述 |
MHP 133 是一种多靶点抑制剂,可以抑制 AChE 的活性,KKi 值为 69 μM;同时抑制毒蕈碱 M1 和 M2 受体,5HT4 受体 和咪唑 I2 受体。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
Ki: 69 μM (AChE)[1]
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| 体外研究 |
MHP-133对毒蕈碱M1和M2受体,5-羟色胺5HT4受体和咪唑I2受体具有活性(> 50％置换或活性)。 MHP-133在细胞系中表现出这种烟碱样活性。虽然用于诱导TrkA表达的ED50仅为约1μM,但它确实预测MHP-133在分化的PC-12细胞中的细胞保护作用,所述细胞被剥夺生长因子24小时。 MHP-133(10-100μM)显着增加培养的星形胶质细胞的sAPP水平40-60％。 MHP-133对切片存活产生双相效应,特别是在齿状回和CA1区[1]。
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| 体内研究 |
在大鼠中,MHP-133(50,100或200μg/ kg,ip)增强了任务的获取并提高了任务准确性。 MHP-133在给药后10分钟开始的会话期间引起任务准确性的显着改善[1]。
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| 激酶实验 |
将大鼠大脑皮质在含有120mM NaCl，5mM KCl，1mM MgCl 2和2mM CaCl 2（pH 7.0）的冰冷的50mM Tris-HCl缓冲液中匀浆。将匀浆在0℃下以37,200g离心20分钟。将沉淀洗涤两次并重悬于新鲜缓冲液中。对于烟碱受体结合，将[3H]胞嘧啶与0.5mg蛋白质和各种浓度的MHP-133或其他配体一起孵育，最终体积为250μL，4℃，120分钟。约10μM（ - ） - 尼古丁用于确定非特异性结合。通过聚乙烯亚胺处理的玻璃纤维滤器快速过滤并用冰冷的缓冲液（Tris-HCl，50mM）洗涤数次，分离结合的放射性。在闪烁计数器中定量或放射性之前，将过滤器在闪烁氟中浸泡6小时。数据一式三份呈现。
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| 细胞实验 |
将PC-12细胞维持在含有7％马血清，7％胎牛血清，1％非必需氨基酸和1％链霉素（DMEM）的Dulbecco改良Eagles培养基中的150-cm2组织培养瓶中。将细胞在37℃，5％CO 2富集的潮湿气氛中温育。对于实际实验，将PC-12细胞以每孔40,000个细胞的密度接种在聚-L-赖氨酸包被的24孔板上，在含有50ng / mL神经生长因子（NGF）的DMEM培养基中。为了获得最大分化，将细胞在DMEM.NGF培养基中维持7天，每2或3天更换培养基。接下来，将分化的细胞与载体或测试药物（在无外源NGF的无血清DMEM培养基中制备）孵育24小时。在每个实验中，在DMEM.NGF培养基中维持一组平行的对照细胞。细胞活力（细胞毒性）通过使用Cell Titer 96细胞增殖/细胞毒性测定试剂盒测定，该试剂盒基于3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物的细胞转化（ MTT）成为可以通过分光光度法检测的甲product产物。在孵育期结束时，吸出培养基并加入15μL在DMEM中的染料溶液。在37℃下4小时后，加入100μL溶解/终止溶液，并在579nm处测量溶解的MTT甲product产物的吸光度。将所有数据标准化为每个平板中未处理的对照细胞。
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| 动物实验 |
雄性Sprague-Dawley，体重250-300g的远交Wistar大鼠在实验前分别饲养在我们的动物护理设施中1周。在实验时，将40只动物随机分配到四个治疗组之一，盐水载体组或施用50,100或200μg/ kg MHP-133的组。在Morris水迷宫装置中测试前30分钟腹膜内施用载体（1mL / kg体重）。该装置由直径1.2米的充水（室温）浴缸组成。安装平台固定在适当的位置并略微浸没在浴缸的西北象限中。平台的颜色与桶的内表面相似，以使其难以可视化。对于放置在测试室周围的墙壁上的视觉提示，浴缸始终保持相同的方向。通过将动物置于远离平台的水中来测试大鼠。在试验之间进行四次连续试验，间隔10分钟。在每次连续试验中，将大鼠首先放在盆的南部象限中，然后是北部，东部和西部象限。监测大鼠在平台上找到（放置至少2个爪子）所需的时间，精确到0.1秒。所有大鼠都在不到90秒的时间内找到了这个平台。
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| 参考文献 |
[1]. Buccafusco JJ, et al. MHP-133, a drug with multiple CNS targets: potential for neuroprotection and enhanced cognition. Neurochem Res. 2007 Jul;32(7):1224-37. Epub 2007 Apr 3.
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