| 描述 |
BMS-819881 是一种黑色素浓缩激素受体1 (MCHR1) 拮抗剂,结合大鼠 MCHR1,Ki 值为 7 nM。BMS-819881 还有效且选择性地作用于 CYP3A4,EC50 为 13 μM.
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
rat MCHR1:7 nM (Ki)
CYP3A4:13 μM (EC50)
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| 体外研究 |
BMS-819881(化合物27)与大鼠血清蛋白结合99.8％,大鼠MCHR1 Ki为7nM。基于FLIPR的分析证实BMS-819881是一种有效且高选择性的MCHR1功能性拮抗剂。 BMS-819881(Kb = 32nM)在过表达MCHR1的异源细胞中有效阻断MCH刺激的Ca2 +动员,但不能抑制10μM表达MCHR2的细胞的MCH介导的Ca2 +动员。在以10μM筛选BMS-819881时,没有观察到与饲养体内平衡相关的20个GPCR组的活性。对于大鼠,狗和猴,BMS-819881与血清蛋白结合的百分比是物种依赖性的,分别为99.8％,99.6％和99.3％。当筛选BMS-819881的细胞色素P450(CYP)活性时,CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6的EC50值>40μM;然而,CYP3A4 EC50为13μM[1]。
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| 体内研究 |
BMS-819881具有适度的终末消除半衰期(t1/2 = 5.7小时,32±8小时,大鼠(1mg/kg,iv)和狗(1mg/kg,iv)14±3小时,和食蟹猴(1 mg/kg,iv))[1]。
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| 激酶实验 |
制备表达突变的（E4Q，A5T）hMCHR1受体的稳定转染的HEK-293细胞的膜并进行差速离心。用0.5-1.0μg膜蛋白在含有10mM MgCl 2,2mM EGTA和0.1％BSA（结合缓冲液）的25mM HEPES（pH7.4）中共培养0.2分钟进行结合实验。对于竞争结合测定，反应在0.06-0.1nM [Phe13，[125 I] Tyr19] MCH和增加浓度的未标记测试分子的存在下进行。通过在预涂有0.075mL含有1％BSA的结合缓冲液的96孔GFC Unifilter板上快速真空过滤终止反应，并用含有0.01％TX-100的0.4mL PBS（pH 7.4）洗涤3次。将过滤器干燥，向每个孔中加入0.05mL的MicroScint 20，随后通过在TopCount微孔板闪烁计数器上的闪烁计数来定量放射性。使用四参数逻辑方程[1]通过非线性最小二乘分析确定抑制常数。
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| 细胞实验 |
将表达人MCHR1或MCHR2受体的稳定的HEK-293细胞以50,000个细胞/孔的密度接种在96孔聚赖氨酸包被的板中，并在DMEM（高葡萄糖（4.5g / mL），25mM HEPES，pH 7.4中培养过夜。 ，10％胎牛血清，1mM NaCl）在37℃，5％CO 2条件下。对于测定，将培养基替换为每孔90mL染料溶液，其由3.8mM Fluo4AM，0.04％Pluronic F-127和2.5mM Probencid在碱性缓冲液（Hank's平衡盐溶液，25mM HEPES，0.1％BSA）中组成。使染料溶液在室温下以柔和的光“加载”1小时。随后除去染料并用75mL碱性缓冲液和75mL稀释的测试化合物（例如，BMS-819881;10μM）代替，并再温育15分钟。通过在基础缓冲液中首先1:50的100％DMSO储备液连续稀释测试和参考化合物，然后在含有2％DMSO的碱性缓冲液中连续（1：3.26）制备测试化合物稀释板，产生12个半对数测试浓度[1] 。
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| 动物实验 |
大鼠，狗和食蟹猴[1]用3种（大鼠，狗和食蟹猴）进行的PK研究用BMS-819881进行，静脉注射1mg / kg [1]。
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| 参考文献 |
[1]. Washburn WN, et al. Identification of a nonbasic melanin hormone receptor 1 antagonist as an antiobesity clinical candidate. J Med Chem. 2014 Sep 25;57(18):7509-22.
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