| 描述 |
GDC-0623 是一种有效的,ATP 竞争性的 MEK1 抑制剂,Ki值为 0.13 nM,对 HCT116 细胞中 KRAS (G13D)的 EC50 值为 42 nM,而对 A375 细胞中 BRAFV600E的 EC50 值为 7 nM。
|
| 相关类别 |
|
| 靶点 |
MEK1:0.13 nM (Ki, +ATP)
|
| 体外研究 |
DC-0623和G-573能够在体外阻止CRAF的MEK磷酸化,并且能够阻断BRAF(V600E)的MEK磷酸化[1]。 GDC-0623是MEK1的有效ATP-非竞争性抑制剂,但与其他两种抑制剂相比,细胞活性有明显变化,只有6倍半最大有效浓度(EC50)降低[2]。
|
| 体内研究 |
GDC-0623(40mg/kg,po)显示MiaPaCa-2异种移植模型中肿瘤生长抑制百分比(％TGI)。与所有三种KRAS模型中的GDC-0973相比,GDC-0623和G-573显示出优异的抗肿瘤活性[1]。
|
| 激酶实验 |
将0.14μM纯化的无活性重组MEK-1蛋白与15μL激酶缓冲液中的抑制剂一起预孵育，包括（20mM MOPS pH7.2,25mM磷酸甘油酯，5mM EGTA，1mM原钒酸钠，1mM DTT，100μMATP） ，15mM MgCl 2）。在30℃温育10分钟后，将1ng BRAF，CRAF或BRAF V600E与0.5μg无活性重组ERK2组合加入到反应中，总体积为20μL。在30℃温育30分钟后，通过加入LaemmLe样品缓冲液使反应停止。通过SDS-PAGE测定磷-MEK的水平来测量酶活性。用SuperSignal West Pico化学发光底物显现免疫反应蛋白。
|
| 细胞实验 |
使用QuickChange定点诱变试剂盒产生Flag-MEK1突变体S212P和S212A。用于N-末端Flag标记的MEK-1的哺乳动物表达载体在HCT116细胞中表达。将1.8×106个HCT116细胞接种在10cm平板中，并在第二天用lipofectamine 2000用17μg表达构建体转染.48小时后，用抑制剂处理细胞指定的时间，收获并在100μL细胞提取缓冲液中裂解。通过SDS-PAGE分析来自每个样品的细胞裂解物。将膜与磷酸-MEK S221，磷酸-ERK1 / 2和MEK1一抗孵育，并通过SuperSignal West Pico化学发光底物分析免疫反应蛋白。
|
| 动物实验 |
通过接种在6-8周龄雌性裸（nu / nu）小鼠的右后侧皮下（sc）重悬于Hank's平衡盐溶液（HBSS）中的5×10 6个细胞建立Colo205异种移植物。 NCI-H2122异种移植物通过在6-8周龄雌性nu / nu小鼠的右后侧接种重悬于Hank's平衡盐溶液（HBSS）和基质胶（生长因子减少）sc中的1×10 7个细胞来建立。 A375和MiaPaca-2异种移植物均通过将来自它们各自传代的肿瘤sc的1mm 3肿瘤片段移植到无胸腺nu / nu小鼠的侧腹来启动。当肿瘤达到约200mm3时，将小鼠随机分组并用每日（QD）口服强饲法（PO）用载体[甲基纤维素0.1％吐温80 0.1％（MCT）]，GDC-0973（10mg / kg），GDC进行治疗。 -0623（40mg / kg），或G-573（100mg / kg）。所有剂量的MEK抑制剂代表最大耐受剂量（MTD），导致体重减轻不超过15-20％。使用数字卡尺使用公式（L×W×W）/ 2确定肿瘤体积。将肿瘤生长抑制（％TGI）计算为相对于媒介物，每天相应剂量组的拟合曲线下面积（AUC）的百分比。每周记录动物重量两次，如果体重下降≥20％，则从研究中取出小鼠。部分反应（PR）定义为肿瘤体积减少≥50％的任何肿瘤，而完全反应（CR）定义为在研究期间任何时刻肿瘤体积减少100％的任何肿瘤。
|
| 参考文献 |
[1]. Hatzivassiliou G, et al. Mechanism of MEK inhibition determines efficacy in mutant KRAS- versus BRAF-driven cancers. Nature. 2013 Sep 12;501(7466):232-6. [2]. Takahashi RH, et al. Elucidating the Mechanisms of Formation for Two Unusual Cytochrome P450-Mediated Fused Ring Metabolites of GDC-0623, a MAPK/ERK Kinase Inhibitor. Drug Metab Dispos. 2015 Dec;43(12):1929-1933.
|
