描述 |
GW4869是非竞争性的中性鞘磷脂酶抑制剂,IC50值为1 μM。
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相关类别 |
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靶点 |
IC50: 1 μM (neutral sphingomyelinase)[1]
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体外研究 |
GW4869(10μM)部分抑制TNF诱导的鞘磷脂(SM)水解,并且20μM化合物完全免于SM的损失。添加10-20μMGW4869完全抑制神经酰胺的初始积累,而这种效应在稍后的时间点(24小时)部分丧失。 GW4869的作用发生在谷胱甘肽下降的下游。 GW4869能够以剂量依赖性方式显着防止细胞死亡。这些保护作用伴随着线粒体和胱天蛋白酶9活化的细胞色素c释放的显着抑制,因此在线粒体功能障碍的上游定位N-SMase活化[1]。
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体内研究 |
用GW4869预处理显着损害RAW264.7巨噬细胞中外来体和促炎细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)的释放。在LPS处理或CLP手术后12小时,用GW4869预处理的WT小鼠在血清中显示出比对照PBS注射小鼠更低量的外泌体和促炎细胞因子。因此,GW4869治疗可减少脓毒症引起的心脏炎症,减轻心肌抑制并延长生存期[2]。
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激酶实验 |
B. cereu sphosphatidylcholine-PLC在存在或不存在10μMGW4869的情况下在含有100mM Tris,pH7.2,25%甘油,20mM对硝基苯基/磷酰胆碱的反应混合物中温育,并且通过分光光度法定量生产对硝基苯酚在410纳米。将来自牛肾的蛋白磷酸酶2A在GW4869存在或不存在下在含有50mM Tris,pH7.4,1mM二硫苏糖醇,100μMMnCl2和20%甘油的缓冲液中温育,并测量磷酸酶活性[1]。
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细胞实验 |
用GW4869处理细胞30分钟,然后以10μL/孔加入TNF。在指定的时间点,向每个孔中加入25μLMTT储备溶液,并在37℃,5%CO 2中孵育3小时。细胞活力是使用MTT测定[1]。
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动物实验 |
小鼠:将小鼠随机分成四组:PBS,GW4869,PBS + LPS和GW4869 + LPS(每组n = 5)。 GW4869以2.5μg/ g的一个剂量腹膜内(ip)注射。在ip注射LPS(25μg/ g)之前1小时腹膜内预注射PBS + LPS组中的小鼠。将GW4869 + LPS组中的小鼠腹膜内注射GW4869(2.5μg/ g)1小时,然后腹膜内注射LPS(25μg/ g,100μl)。小鼠接受PBS注射至与对照相当的体积(100μl)。每6小时监测PBS + LPS和GW4869 + LPS组的存活率,持续36小时[2]。
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参考文献 |
[1]. Luberto C, et al. Inhibition of tumor necrosis factor-induced cell death in MCF7 by a novel inhibitor of neutralsphingomyelinase. J Biol Chem. 2002 Oct 25;277(43):41128-39. [2]. Essandoh K, et al. Blockade of exosome generation with GW4869 dampens the sepsis-induced inflammation and cardiac dysfunction. Biochim Biophys Acta. 2015 Nov;1852(11):2362-71. [3]. Nakamura H, et al. Sphingomyelin Regulates the Activity of Secretory Phospholipase A2 in the Plasma Membrane. J Cell Biochem. 2015 Sep;116(9):1898-907.
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