Spebrutinib besylate

Spebrutinib besylate (AVL-292 benzenesulfonate; CC-292 besylate) 是共价,高选择性和口服活性的 Btk 抑制剂,IC50 为0.5 nM。

信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> BTK

研究领域 >> 癌症

IC50: <0.5 nM (Btk)[1]

Spebrutinib(CC-292)是一种共价,高选择性,口服有效的Btk抑制剂,IC50值为0.5 nM。 Spebrutinib也不太有效抑制Yes,c-Src,Brk,Lyn和Fyn,IC50分别为723 nM,1.729μM,2.43μM,4.4μM和7.15μM。大量分析显示,Ramos细胞中Spebrutinib剂量反应的Btk占有率EC50(EC50 = 6 nM)与Spebrutinib对Btk激酶抑制的细胞EC50直接相关(EC50 = 8 nM)。此外,Spebrutinib抑制Ramos细胞中90％Btk活性的浓度为35 nM,而90％Btk占据所需的Spebrutinib浓度为39 nM [1]。

将细胞在无血清RPMI培养基中孵育1-1.5小时。将分离的人B细胞与Spebrutinib一起孵育，终浓度为0.001,0.01,0.1和1μM。将Ramos细胞与0.1nM-3μMSpebrutinib一起温育。然后将细胞在化合物存在下于37℃温育1小时。孵育后，将细胞离心并重悬于100μL无血清RPMI中，并加入5μg/mLα-人IgM刺激BCR。将样品离心，在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中洗涤，并在100μL细胞提取缓冲液加1:10（v / v）PhosSTOP磷酸酶抑制剂和1:10（v / v）完全蛋白酶抑制剂中裂解。用于免疫印迹分析的抗体包括P-PLCγ2，PLCγ2（3871; CST），Syk（2712; CST），P-Syk（2710; CST），Btk，P-Btk和微管蛋白。使用红外荧光检测在Li-Cor Odyssey扫描仪上扫描膜[1]。

[1]. Evans EK, et al. Inhibition of Btk with CC-292 provides early pharmacodynamic assessment of activity in mice and humans. J Pharmacol Exp Ther. 2013 Aug;346(2):219-28.

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