PF-04691502

PF-04691502用途

PF-04691502 是一种有效的选择性的 PI3K 和 mTOR 抑制剂。PF-04691502 抑制人和鼠 PI3Kα，K_i 分别为 1.8 和 1.2 nM，抑制人 PI3K 亚型 β，δ 和 γ，K_i 分别为 2.1，1.6 和 1.9 nM，抑制人 mTOR，K_i 为 16 nM。

PF-04691502名称

[ CAS 号 ]:
1013101-36-4

[ 中文名 ]:
2-氨基-8-((1r,4r)-4-(2-羟基乙氧基)环己基)-6-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮

[ 英文名 ]:
PF-04691502

[中文别名 ]:

雌激素三醇

[英文别名 ]:

PF-04691502

PF-04691502生物活性

[ 描述 ]:

PF-04691502是有效和选择性的 PI3K 和 mTOR 的抑制剂。 PF-04691502与人PI3Kα,β,δ,γ和mTOR结合的 Ki 分别为1.8,2.1,1.6,1.9和16 nM。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> PI3K/Akt/mTOR 信号通路 >> mTOR

信号通路 >> PI3K/Akt/mTOR 信号通路 >> PI3K

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

PI3Kα:1.8 nM (Ki)

PI3Kβ:2.1 nM (Ki)

PI3Kδ:1.6 nM (Ki)

PI3Kγ:1.9 nM (Ki)

mTOR:16 nM (Ki)

[体外研究]

PF-04691502在ATP竞争性抑制剂中抑制重组小鼠PI3Kα。 PF-04691502在所有3种癌细胞系中有效抑制S473和T308上的AKT磷酸化,IC50值分别为3.8至20nM和7.5至47nM。使用基于96孔板的P-S6RP(S235/236)ELISA测定,PF-04691502有效抑制mTORC1活性,IC50为32nM。 PF-04691502抑制BT20,SKOV3和U87MG的细胞增殖,IC50值分别为313,188和179nM。在PIK3CA突变体和PTEN缺失的癌细胞系中,PF-04691502降低AKT T308和AKT S473的磷酸化(IC50分别为7.5-47 nM和3.8-20 nM)并抑制细胞增殖(IC50为179-313 nM) 。 PF-04691502通过PI3K非依赖性营养刺激测定法抑制细胞中mTORC1的活性,IC50为32 nM,并抑制PI3K和mTOR下游效应物的活化,包括AKT,FKHRL1,PRAS40,p70S6K,4EBP1和S6RP [1] 。

[体内研究]

携带U87MG肿瘤的裸鼠每天一次口服给予PF-04691502,剂量为0.5,1,5和10mg/kg(最大耐受剂量,MTD)。用10mg/kg治疗导致给药后1小时P-AKT(S473)水平显着降低,并观察到持续抑制8小时。在10mg/kg处理后24小时,P-AKT(S473)恢复至基线以上。对于P-S6RP(S235/236),观察到类似的抑制时间过程,但是在处理24小时后,P-S6RP水平仍然低于载体肿瘤。观察到AKT下游效应子P-PRAS40(T246)和mTOR下游效应子P-4EBP1(T37/46)的调节。还通过免疫组织化学评估PF-04691502处理的肿瘤的P-AKT(S473),总AKT,P-S6RP和总S6RP的水平。在10mg/kg的单剂量PF-04691502后4小时,AKT和S6RP的磷酸化显着降低。在U87MG异种移植模型中获得剂量依赖性肿瘤生长抑制(TGI),并且在10mg/kg的MTD剂量下观察到约73％TGI [1]。

[激酶实验]

评估了I类PI3K和mTOR的生化蛋白激酶测定。用于ATP竞争性抑制的荧光偏振测定如下进行：在新鲜测定缓冲液（50mM Hepes pH 7.4,150mM NaCl，5mM DTT，0.05％CHAPS）中制备mPI3Kα稀释溶液（90nM）并保持在冰上。酶反应含有0.5 nM小鼠PI3Kα（从昆虫细胞中纯化的p110α/p85α复合物），30μMPIP2，PF-04691502（0,1,4和8 nM），5 mM MgCl2和2倍连续稀释的ATP （0-800μM）。最终的DMSO为2.5％。通过加入ATP引发反应，并在30分钟后用10mM EDTA终止反应。在检测板中，将15uL含有480nM GST-Grp1PH结构域和12nM TAMRA标记的荧光PIP3的检测器/探针混合物与测定缓冲液在15μL激酶反应混合物中混合。将板振荡3分钟，并在读取LJL Analyst HT [1]之前孵育35至40分钟。

[细胞实验]

将BT20，U87MG和SKOV3细胞以3,000个细胞/孔接种在含有10％FBS的生长培养基中的96孔培养板中。将细胞培养过夜，并用DMSO（0.1％终浓度）或连续稀释的化合物处理3天。刃天青的添加量为0.1 mg / mL。将板在37℃，5％CO 2中温育3小时。在530nm激发后，荧光信号在590nm处被读取为发射。通过在非线性曲线中绘制荧光强度与药物浓度来计算IC 50值。将U87MG和SKOV3细胞在96孔板中铺板过夜，并用Caspase-Glo 3/7测定试剂盒评估胱天蛋白酶-3 /半胱天冬酶-7活性[1]。

[动物实验]

小鼠[1]使用雌性nu / nu小鼠（6-8周龄）。收获用于植入的肿瘤细胞并重悬于与基质胶（1：1）混合的无血清培养基中。将SKOV3，U87MG或NSCLC细胞（2.5-4×106）皮下植入后胁腹区域。当平均肿瘤大小为100至200mm 3时开始治疗。 PF-04691502用0.5％甲基纤维素水悬浮液配制，每天口服一次。每2至3天测量动物体重和肿瘤体积。用游标卡尺测定肿瘤体积并计算。计算肿瘤生长抑制（TGI）的百分比。数据表示为平均值±SE。治疗组和媒介物组之间的比较使用Dunnett测试的单向ANOVA进行。学生t检验用于确定2组比较的P值。

[参考文献]

[1]. Yuan J, et al. PF-04691502, a potent and selective oral inhibitor of PI3K and mTOR kinases with antitumor activity. Mol Cancer Ther. 2011 Nov;10(11):2189-99.

[相关活性小分子]

PF-04691502物理化学性质

[ 密度 ]:
1.4±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
682.5±65.0 °C at 760 mmHg

[ 分子式 ]:
C₂₂H₂₇N₅O₄

[ 分子量 ]:
425.481

[ 闪点 ]:
366.5±34.3 °C

[ 精确质量 ]:
425.206299

[ PSA ]:
125.38000

[ LogP ]:
1.43

[ 外观性状 ]:
粉末

[ 蒸汽压 ]:
0.0±2.2 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.646

[ 储存条件 ]:
-20℃

PF-04691502安全信息

[ 危险品运输编码 ]:
NONH for all modes of transport