S-鲁索替尼(INCB018424)的生物活性和实验方法

发布时间:2018-10-20 22:18:59 编辑作者:活性小子

S-鲁索替尼图片

图片:S-鲁索替尼结构式

S-鲁索替尼(INCB018424)是第一个进入临床的高活性JAK1和2选择性抑制剂,IC50分别为3.3 nM和2.8 nM,比对JAK3的抑制性高130倍以上。

一、S-鲁索替尼的生物活性:
1)体外活性
INCB018424在Ba/F3细胞中以剂量依赖性方式显著增加细胞凋亡。INCB018424作用于Ba/F3细胞和HEL细胞,有效且选择性抑制JAK2V617F介导的信号和增殖。INCB018424(64 nM) 导致Ba/F3细胞线粒体去极化增加一倍。INCB018424抑制正常供体和真性红细胞增多症患者提供的红系祖细胞增殖,IC50分别为407 nM 和 223 nM。INCB018424表现出对红系细胞集落形成的有效作用,IC50为67 nM。

2)体内活性
INCB018424(180 mg/kg,口服,每天两次)显著减少JAK2V617F驱动的小鼠模型中脾肿大和炎性细胞因子的循环水平,并优先消灭肿瘤细胞,显著延长生存期,且未产生骨髓抑制或免疫抑制。上述小鼠在第22天存活率超过90%。15 mg Ruxolitinib处理骨髓纤维化患者,每天两次,在48周时,28%患者的脾脏体积减少至少35%。Ruxolitinib组的患者整体生活质量改善,与骨髓纤维化有关的症状减轻。kg为121%)。 对于50和100mg / kg /天组,分别在3/10和8/8小鼠中观察到完全消退。

二、S-鲁索替尼的实验方法:
1)细胞实验
Ba / F3和HEL细胞浓度:3μM方法:将细胞以2×103 /孔的白底96孔板接种,用来自DMSO原液的INCB018424处理(0.2%最终DMSO浓度),并在37℃温育48小时。 在含有5%CO2的气氛中。 通过使用Cell-Titer Glo荧光素酶试剂或活细胞计数的细胞ATP测定来测量活力。 将值转化为相对于载体对照的抑制百分比,并使用PRISM GraphPad根据数据的非线性回归分析拟合IC 50曲线。

2)动物实验
动物模型:JAK2V617F驱动的小鼠模型配方和剂量:5%二甲基乙酰胺,0.5%甲基纤维素。 180 mg / kg给药:口服强饲。

3)激酶实验
用亲和层析纯化用Sf21细胞和杆状病毒载体表达的重组蛋白。 通过具有肽底物(-EQEDEPEGDYFEWLE)的均相时间分辨荧光测定进行JAK激酶测定。 每种酶反应用Ruxolitinib或对照,JAK酶,500nM肽,三磷酸腺苷(ATP; 1mM)和2%二甲基亚砜(DMSO)进行1小时。 IC50是抑制50%荧光信号所需的INCB018424浓度。

综上所述,S-鲁索替尼是第一种有效的选择性JAK1 / 2抑制剂。它的靶点活性为Chk2,>1μM;JAK1,3.3nM;JAK2,2.8nM;JAK3,428nM;Tyk2,19nM。

参考文献:
1. Quintas-Cardama A, et al. Blood, 2010, 115(15), 3109-3117.
2. Verstovsek S, et al. N Engl J Med, 2012, 366(9), 799-807.
3. Harrison C, et al. N Engl J Med, 2012, 366(9), 787-798.

相关化合物:S-鲁索替尼

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