PHA-680632的作用 - 生物活性 - 靶点活性

PHA-680632，CAS号是398493-79-3，它是Aurora A，Aurora B和Aurora C的有效抑制剂，IC50分别为27 nM，135 nM和120 nM。它对FGFR1，FLT3，LCK，PLK1，STLK2和VEGFR2 / 3的IC50高10至200倍。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍PHA-680632的生物活性：

1）体外活性
与Aurora A相比，PHA-680632显示FLT3，LCK，PLK1，STLK2，VEGFR2和VEGFR3的IC50高30至200倍.PHA-680632在多种细胞类型中具有有效的抗增殖活性。对于C33A，HeLa，HCT116，HT29，LOVO，A549，MCF7，A2780，U2OS，DU145，IC50为0.32,0.41,0.06,1.17,0.56,0.62,0.29,0.11,1.56,0.62,0.07,0.13,0.41μM， U937，HL60，NHDF。PHA-680632可在肿瘤细胞中引起多倍性。PHA-680632细胞处理诱导类似于Aurora A或B耗尽的表型[1]。PHA680632抑制不同癌细胞系中的集落形成并诱导多倍体。PHA-680632对Aurora-A的抑制增强了癌细胞的辐射反应，尤其是p53缺陷细胞[2]。

2）体内活性
PHA-680632抑制动物模型中的肿瘤生长。在HL60人急性髓性白血病异种移植模型中，45mg / kg剂量的PHA-680632治疗导致85％的TGI没有毒性迹象。PHA-680632以60mg / kg静脉内治疗。出价。持续5天导致78％的TGI在A2780人卵巢癌模型中没有毒性迹象[1]。与辐射相关的PHA680632在癌细胞中产生累加效应，特别是在p53缺陷细胞中，但不起放射增敏剂的作用[2]。

我们已经了解了PHA-680632的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
在24孔板中用适当的完全培养基以5,000至15,000cm 2的不同密度接种细胞。24小时后，用PHA-680632处理平板，并在37℃，5％CO 2气氛中温育72小时。在孵育时间结束时，将细胞从每个平板上分离并使用细胞计数器计数。IC50s使用生长百分比与未治疗对照组合计算[1]。

2）动物实验
小鼠：将肿瘤异种移植小鼠随机分成四组（每组六只小鼠）：A，对照; B，单独IR，1天内8Gy; C，PHA-680632单独，40mg / kg，b.i.d。，持续4天; D，相同剂量的PHA-680632与IR组合（第一次施用PHA680632后24小时，与IR单独相似），持续4天。腹膜内（i.p.）给予药物或媒介物对照（在5％葡萄糖溶液中相同体积的20％吐温-80）。使用电子卡尺每周测量肿瘤大小两次。对个体小鼠进行随访。肿瘤体积由2D肿瘤测量估计[2]。

3）激酶实验
使用闪烁亲近测定形式评估PHA-680632对激酶活性的抑制。在该测定中，生物素化的底物在存在用γ33-ATP追踪的ATP的情况下被激酶转磷酸化。然后使用链霉抗生物素蛋白包被的闪烁亲近测定珠捕获磷酸化的底物，并且在静置4小时后通过β-计数器评估磷酸化程度，以使珠在密集的5M CsCl溶液上漂浮。特别地，源自Chocktide序列的肽（LRRWSLGL）用作Aurora A的底物，而优化的肽Auroratide1用于Aurora B和C.该测定在96孔板上以自动化形式进行。评估化合物对极光激酶和29种属于我们的激酶选择性筛选组的其他激酶的效力，并确定相关的IC50 [1]。

今天介绍了PHA-680632的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，PHA-680632是极光激酶抑制剂 (aurora)，对aurora A，B和C的 IC50 值分别为27，135和120 nM。它的靶点活性是Aurora A,27nM；Aurora B,135nM；Aurora C,120nM；FGFR1,390nM；PLK1,780nM。

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参考文献：
[1]. Soncini C, et al. PHA-680632, a novel Aurora kinase inhibitor with potent antitumoral activity. Clin Cancer Res. 2006 Jul 1;12(13):4080-9.
[2]. Tao Y, et al. Enhancement of radiation response by inhibition of Aurora-A kinase using siRNA or a selective Aurora kinase inhibitor PHA680632 in p53-deficient cancer cells. Br J Cancer. 2007 Dec 17;97(12):1664-72.