【BI 2536】- 作用 - 生物活性 - 靶点活性

BI 2536是一种有效的Plk1抑制剂（IC50：0.83 nM）。它的选择性比Plk2和Plk3高4倍和11倍。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍BI 2536的生物活性：

1）体外活性
超过10倍浓度范围从10nM开始，BI 2536使HeLa细胞以4N DNA含量积累，表明G2期或有丝分裂中的细胞周期阻滞。除了HeLa细胞，BI 2536还有效抑制一组32种人类癌细胞系的增殖，代表不同的器官来源（包括乳腺癌，结肠癌，肺癌，胰腺癌和前列腺癌，黑色素瘤和造血系统癌）肿瘤抑制因子或癌基因突变的模式（包括RB1，TP53，PTEN和KRAS状态）。该细胞组中的半数最大有效浓度（EC 50）值范围为2-25nM，而100nM BI 2536的浓度通常足以诱导完全有丝分裂停滞。指数生长的hTERT-RPE1，人脐静脉内皮细胞（HUVECs）和正常大鼠肾（NRK）细胞的增殖在12-31 nM的EC50值下被阻断，表明循环未转化细胞对BI 2536的敏感性相当[3] 。

2）体内活性
BI 2536（40-50mg / kg，i.v。）阻断免疫缺陷的nu / nu小鼠中人癌异种移植物的生长。静脉内给予40-50mg / kg BI 2536的连续循环。每周一次或两次被发现在多种异种移植模型中非常有效，例如具有完全肿瘤抑制的HCT 116结肠癌，每周两次（治疗对照（T / C）值0.3％）和T / C值为16％，每周一次治疗; 根据临床症状和没有重大体重变化判断，两种方案都具有良好的耐受性[3]。

我们已经了解了BI 2536的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
通过在各种浓度的BI 2536（10nM-1μM）存在下孵育72小时来进行细胞增殖测定，并通过在荧光分光光度计中测量Alamar Blue染料转化来评估细胞生长。从剂量 - 反应曲线拟合外推细胞生长被抑制50％（EC50）的有效浓度[3]。

2）动物实验
小鼠[3]-雌性BomTac：NMRI-Foxn1nu小鼠皮下注射HCT116结肠癌，NCI-H460或A549肺癌细胞，分别皮下注射2×106,1×106和1×107细胞到侧腹每只老鼠。当肿瘤达到约50mm 3的体积时，将动物配对进入治疗组和对照组，每组10只小鼠。在回归实验中，直到平均肿瘤体积达到500mm 3才开始治疗。将BI 2536以指定的剂量和时间表静脉内注射到尾静脉中。给药体积为每公斤体重10mL。用卡尺每周测定肿瘤体积三次。通过以下公式将结果转换为肿瘤体积（mm 3）：长×宽2×π/ 6。确定小鼠的体重作为同一天耐受性的指标。对于统计学分析，在单侧（递减）精确Wilcoxon检验中将治疗组与媒介物对照组进行比较。

3）激酶实验
Plk1，Plk2和Plk3的酶活性测定在连续稀释的抑制剂（BI 2536）存在下进行，其中20ng重组激酶和10mg来自牛乳的酪蛋白作为底物。激酶反应最终体积为60 mL，在30°C下进行45分钟（15 mM MgCl2,25 mM MOPS [pH 7.0]，1 mM DTT，1％DMSO，7.5 mM ATP，0.3mCiγ-P33-ATP）。通过加入125mL冰冷的5％TCA终止反应。在将沉淀物转移至多筛混合酯纤维素滤板后，用1％TCA洗涤板并用放射性法定量。剂量 - 反应曲线用于计算IC50值[3]。

今天介绍了BI 2536的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，BI 2536是 PLK1 和 BRD4 的双抑制剂，IC50 分别为0.83 和 25 nM。它的靶点活性是Met,4.754μM；PI3Kα,2.407μM；PLK1,0.83nM；PLK2,3.5nM；PLK3,9.0nM。

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参考文献：
[1]. Lénárt P, et al. The Small-Molecule Inhibitor BI 2536 Reveals Novel Insights into Mitotic Roles of Polo-like Kinase 1. Curr Biol. 2007 Feb 20;17(4):304-15.
[2]. Chen L, et al. BRD4 Structure-Activity Relationships of Dual PLK1 Kinase/BRD4 Bromodomain Inhibitor BI-2536. ACS Med Chem Lett. 2015 May 18;6(7):764-9.
[3]. Steegmaier M, et al. BI 2536, a Potent and Selective Inhibitor of Polo-like Kinase 1, Inhibits Tumor Growth In Vivo. Current Biology (2007), 17(4), 316-322.
[4]. Jeong SB, et al. Essential role of Polo-like kinase 1 (Plk1) oncogene in tumor growth and metastasis of tamoxifen-resistant breast cancer. Mol Cancer Ther. 2018 Apr;17(4):825-837.