| 描述 |
FL-411 是一种有效的选择性 BRD4 抑制剂,抑制 BRD4(1),IC50 为 0.43±0.09 μM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
BRD4(1):0.43 μM (IC50)
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| 体外研究 |
FL-411是一种选择性BRD4抑制剂。通过TR-FRET测量FL-411与BRD2(1),BRD4(1)和BRD4(2)的第一和第二溴结构域的结合亲和力,IC50为24.60±0.70μM,0.47±0.02μM,0.93±0.05 μM,分别。 FL-411具有良好的BRD4(1)抑制活性(IC50 = 0.43±0.09μM),抗增殖活性(MCF-7,IC50 = 1.62±0.06μM; MDA-MB-231,IC50 = 3.27±0.14μM),自噬活性(MCF-7细胞中42.29％),以及对MCF10A细胞的低毒性)。 FL-411通过阻断BRD4-AMPK相互作用诱导ATG5依赖性自噬相关细胞死亡(ACD),从而激活乳腺癌细胞中AMPK-mTOR-ULK1调节的自噬途径[1]。
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| 体内研究 |
为了评估FL-411在体内的抗肿瘤活性,使用两种乳腺肿瘤异种移植模型,即MCF-7和MDA-MB-231细胞系模型。使用三种不同剂量的FL-411：25mg/kg,50mg/kg和100mg/kg进行体内研究。在所有模型中,FL-411以剂量依赖性方式显示显着的肿瘤生长抑制,如通过MCF-7和MDA-MB-231细胞模型中的80％和76％肿瘤生长抑制率所确定的。在所有剂量组中观察到显着的肿瘤重量损失(p <0.001)。 FL-411对所有治疗组的体重没有明显影响。为了检查FL-411介导的体内肿瘤生长抑制是否与细胞增殖减少和自噬相关细胞死亡增加相关,对照和FL-411处理小鼠的肿瘤组织进行Ki-67免疫组化分析。和LC3。 FL-411治疗明显减少了Ki-67(p <0.001)阳性细胞的数量,并增加了自噬水平,这可通过增加LC3表达来确定(p <0.001)[1]。
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| 细胞实验 |
将MCF-7和MDA-MB-231细胞以5×10 4个细胞/ mL的密度分配在96孔平底微量滴定板中。孵育24小时后，分别用1.5和3μMFL-411处理MCF-7或MDA-MB-231细胞。在用FL-411处理前1小时加入3-MA（1mM）。处理后，通过MTT测定法测量细胞活力。每孔加入5mg / mL MTT。温育4小时后，除去培养基并向每个孔中加入150μLDMSO以溶解结晶甲染料。在酶联免疫吸附测定读数器上测量570nm处的吸光度[1]。
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| 动物实验 |
小鼠[1] 52只雌性裸鼠（BALB / c，6-8周，20-22g）分别皮下注射MCF-7细胞或MDA-MB-231细胞（5×106细胞/小鼠）。当肿瘤体积达到100mm 3时，对于每种细胞系将小鼠分成四组。三组用不同剂量的FL-411（低剂量，25mg / kg;中位剂量，50mg / kg;高剂量，100mg / kg）每天一次通过胃内给药治疗24或27天，而对照组用载体对照治疗。在治疗期间，每3天测量肿瘤体积和体重直至研究结束。在治疗结束时，处死所有小鼠。收获肿瘤组织，称重并拍照。然后，肿瘤组织在液氮中冷冻或立即在福尔马林中固定[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Ouyang L, et al. Discovery of a Small-Molecule Bromodomain-Containing Protein 4 (BRD4) Inhibitor That InducesAMP-Activated Protein Kinase-Modulated Autophagy-Associated Cell Death in Breast Cancer. J Med Chem. 2017 Dec 28;60(24):9990-10012.
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