| 描述 |
LYN-1604 是一种有效的 UNC-51 样激酶 1 (ULK1) 激动剂,其 EC50 值为 18.94 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
EC50: 18.94 nM (ULK1)[1]
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| 体外研究 |
LYN-1604是一种有效的UNC-51样激酶1(ULK1)激动剂,在ADP-Glo™激酶试验中的EC50为18.94 nM。体外激酶测定显示LYN-1604在野生型ULK1转染的HEK-293T细胞中增加了ser318处mATG13的磷酸化。发现LYN-1604处理的细胞在MDC染色下显示出显着的绿色荧光,并且自噬比率以剂量依赖性的方式增加。还发现LYN-1604诱导Beclin-1的显着上调和p62的降解,以及LC3-I向LC3-II的转化[1]。
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| 体内研究 |
基于肿瘤体积和重量的结果,发现LYN-1604可显着抑制异种移植物MDA-MB-231细胞的生长。小鼠的体重是稳定的,在LYN-1604处理的小鼠和对照小鼠之间没有明显的区别。它还揭示了LYN-1604在体内诱导显着的自噬[1]。
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| 激酶实验 |
用LYN-1604处理细胞或肿瘤组织达指定的时间。收集粘附细胞和漂浮细胞，并进行蛋白质印迹分析。简而言之，用含有50mM HEPES，pH 7.4的裂解缓冲液重悬细胞沉淀; 1％Triton-X-100,2mM原钒酸钠，100mM氟化钠，1mM乙二胺四乙酸，1mM PMSF，10mg / L抑肽酶和10mg / Lleupeptin，并在4℃下裂解1小时。在12000rpm离心15分钟后，通过Bio-Rad DC蛋白测定[1]测定上清液的蛋白质含量。
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| 细胞实验 |
将细胞以5×10 4个细胞/ mL的密度分配在96孔板中。温育24小时后，用不同浓度的LYN-1604处理细胞指定的时间段。通过MTT测定法测量细胞活力[1]。
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| 动物实验 |
使用24只雌性裸鼠（BALB / c，6至8周，20至22g）并皮下注射MDA-MB-231细胞（每只小鼠5×10 6个细胞）。当肿瘤体积达到100mm 3（V = L×W2 / 2）时，将小鼠分成四组。三组每天一次用不同剂量的LYN-1604治疗，灌胃给药14天（低剂量，25mg / kg;中位剂量，50mg / kg;高剂量，100mg / kg），而对照组用载体对照治疗。在治疗期间，每天测量肿瘤体积和体重直至研究结束。在治疗结束时，处死所有小鼠。收获脾脏，肝脏，肾脏和肿瘤组织，称重并拍照，然后立即在液氮中冷冻或在福尔马林中固定[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Zhang L, et al. Discovery of a small molecule targeting ULK1-modulated cell death of triple negative breast cancer in vitro and in vivo. Chem Sci. 2017 Apr 1;8(4):2687-2701.
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