| 描述 |
TAPI-2 是基质金属蛋白酶(MMP),肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)和解联蛋白和金属蛋白酶(ADAM)的广谱抑制剂, 对MMP的IC50值为20±10 μM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 20±10 μM (MMP)[1]Ki: 1.5±0.27 nM (MMPs)[1]
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| 体外研究 |
基于异羟肟酸的金属蛋白酶抑制剂TAPI-2与hmeprin结合,对于hmeprinβ亚基,抑制常数IC50为20±10μM,对于hmeprinα亚基,抑制常数为1.5±0.27nM。通常,hmeprinα比β亚基更强烈地被抑制[1]。在不影响ADAM17表达的情况下,TAPI-2显着降低了HCP-1和HT29细胞中NICD及其下游靶HES-1的蛋白质水平。此外,在两种CRC细胞系中,用TAPI-2处理细胞显着降低了CSC表型-50％。 TAPI-2对NICD和HES-1球形成和蛋白水平的剂量依赖性影响证实所用浓度(20μM)在TAPI-2(5-40μM)的有效剂量范围内[2] 。
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| 激酶实验 |
使用N-苯甲酰基-L-酪氨酰对氨基苯甲酸作为底物测定Meprin活性。底物浓度为40mM，酶浓度总是低于Ki的至少10倍。抑制剂的使用浓度范围为5μM至5mM，这取决于它们的抑制作用。在覆盖至少十种不同浓度的Ki / 5至5×Ki的浓度范围内测试每种抑制剂。所有反应均在37℃，50mM Tris / HCl，pH 7.5和0.5mM MgCl 2 [1]中进行。
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| 细胞实验 |
将TAPI-2溶解在DMSO中并在使用前用适当的培养基稀释。所有实验均使用20μMTAPI-2进行。将细胞与或不与TAPI-2一起培养48小时，然后以每孔3,000个细胞接种于96孔板中。预处理后，加入与推荐临床剂量（最高2μg/ mL）相关的增加剂量的5-氟尿嘧啶（5-FU），有或没有TAPI-2，持续72小时。通过在37℃下将生长培养基（1：5稀释）中的MTT底物（0.25％在磷酸盐缓冲盐水[PBS]中）加入细胞中1小时来评估细胞活力。用PBS洗涤细胞，并加入100μL二甲基亚砜。光密度在570nM下测量，相对MTT以对照的百分比表示[2]。
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| 参考文献 |
[1]. Kruse MN, et al. Human meprin alpha and beta homo-oligomers: cleavage of basement membrane proteins and sensitivity to metalloprotease inhibitors. Biochem J. 2004 Mar 1;378(Pt 2):383-9. [2]. Wang R, et al. A Disintegrin and Metalloproteinase Domain 17 Regulates Colorectal Cancer Stem Cells and Chemosensitivity Via Notch1 Signaling. Stem Cells Transl Med. 2016 Mar;5(3):331-8.
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