| 描述 |
ARS-853是选择性,共价的 KRASG12C 抑制剂,IC50 为2.5 μM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 2.5 μM (KRASG12C)[1]
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| 体外研究 |
ARS853旨在以高亲和力结合KRASG12C。用ARS853处理KRASG12C-突变肺癌细胞使GTP结合的KRAS水平降低超过95％(10μM)。 ARS853抑制增殖,抑制浓度50％(IC50)为2.5μM,这与其靶标抑制的IC50相似。 ARS853(10μM)在6种KRASG12C突变肺癌细胞系中不同程度地抑制效应信号传导和细胞增殖,但在非KRASG12C模型中则不然。同样,它完全抑制外源性KRASG12C表达对KRAS-GTP水平,KRAS-BRAF相互作用和ERK信号传导的影响。 ARS-853处理还诱导四种KRASG12C突变细胞系中的细胞凋亡。 ARS853选择性地降低KRASG12C突变细胞中的KRAS-GTP水平和RAS效应信号,同时抑制其增殖并诱导细胞死亡[1]。 ARS-853通过与GDP结合的癌蛋白结合并阻止活化来抑制突变KRAS驱动的信号传导[2]。
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| 激酶实验 |
将纯化的KRAS（1μM）在室温下孵育EDTA（10mM）和GDP（1mM）或GTPγS（1mM）1小时，然后加入MgCl 2（1mM）以终止反应。然后加入ARS853（1μM）并将混合物在室温下再温育1小时。表达各种KRAS突变体的HEK293细胞用ARS853处理。使用含有9M尿素，10mM DTT和50mM碳酸氢铵，pH8的缓冲液提取蛋白质，加热至65℃15分钟，并使用50mM碘乙酰胺在37℃下烷基化30分钟。在Zeba旋转脱盐板中通过凝胶过滤使样品脱盐，然后加入测序级胰蛋白酶至浓度为10μg/ ml，并在37℃温育1小时。将重组同位素标准品（25fmol）的KRASG12C靶肽和KRAS标准化肽加入样品中，然后在Strata-X聚合物反相板中脱盐。 LC-MS / MS分析在标准条件下在Q Exactive四极杆轨道阱质谱仪中进行。由药物结合的KRASG12C的量由修饰的G12C肽与重同位素标准的比例确定[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Lito P, et al. Allele-specific inhibitors inactivate mutant KRAS G12C by a trapping mechanism. Science. 2016 Feb 5;351(6273):604-8. [2]. Patricelli MP, et al. Selective Inhibition of Oncogenic KRAS Output with Small Molecules Targeting the Inactive State. Cancer Discov. 2016 Mar;6(3):316-29.
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