描述 |
Nemorexant 是一种 orexin 受体拮抗剂,详细信息请参考专利文献 WO2015083094A1 中的化合物 example 7。作用于 Ox1 和 Ox2 受体,IC50 分别为 2 nM 和 3 nM。
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相关类别 |
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靶点 |
IC50: 2 nM (Ox1 receptor ), 3 nM (Ox2 receptor)[1]
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体外研究 |
Nemorexant(化合物实施例7)是食欲素受体拮抗剂,对于Ox1受体和Ox2受体,IC50分别为2nM和3nM [1]。
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细胞实验 |
分别表达人食欲素-1受体和人食欲素-2受体的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞在含有300μg/ mL G418,100U / mL的培养基(含有L-谷氨酰胺的Ham F-12)中生长。青霉素,100μg/ mL链霉素和10%热灭活的胎牛血清(FCS)。将细胞以20,000个细胞/孔接种到384孔黑色透明底无菌平板中。将接种的平板在37℃,5%CO 2中孵育过夜。将作为激动剂的人食欲素-A制备成在MeOH:水(1:1)中的1mM储备溶液,在含有0.1%牛血清白蛋白(BSA),NaHCO 3:0.375g / L和20mM HEPES的HBSS中稀释,用于最终浓度为3nM的测定。将拮抗剂制备成DMSO中的10mM储备溶液,然后使用DMSO在384孔板中稀释,然后将稀释液转移到含有0.1%牛血清白蛋白(BSA),NaHCO 3:0.375g / L和20mM HEPES的HBSS中。 。在测定当天,50μL染色缓冲液(HBSS含有1%FCS,20mM HEPES,NaHCO3:0.375g / L,5mM丙磺舒和3μM荧光钙指示剂fluo-4 AM(1mM储备溶液)在每个孔中加入含有10%pluronic的DMSO。将384孔细胞板在37℃,5%CO 2中孵育50分钟,然后在室温下平衡30分钟,然后测量。在荧光成像板内将读数器,拮抗剂以10μL/孔的体积加入板中,孵育120分钟,最后加入10μL/孔的激动剂。以1秒的间隔测量每个孔的荧光,并测量每个荧光峰的高度。将大约EC70(例如5nM)的食欲素-A与载体代替拮抗剂诱导的荧光峰的高度进行比较,确定IC50值[1]。
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参考文献 |
[1]. BOSS, Christoph, et al. USE OF BENZIMIDAZOLE-PROLINE DERIVATIVES. WO2015083094A1.
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