| 描述 |
PLX8394 是一种有效的,选择性的 Raf 抑制剂,抑制 BRAFV600E 活性的 IC50 值约为 5 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
BRafV600E:5 nM (IC50)
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| 体外研究 |
PLX8394在> 25nM下有效抑制PRT＃3和PRT＃4细胞中ERK1/2的磷酸化,并且除了10nM的亲本细胞外还有效抑制ERK1/2的磷酸化。 PLX8394有效减少细胞周期蛋白D3和细胞周期蛋白D1,视网膜母细胞瘤蛋白的磷酸化,以及亲代细胞和PRT＃3和PRT＃4细胞中细胞周期蛋白A2的表达。 PLX8394抑制ERK1/2磷酸化和vemurafenib抗性细胞的生长,所述细胞携带BRAF V600K/L505H双突变或转座子诱导的N末端截短形式的BRAF [1]。 PLX8394显着损害肿瘤细胞生长并抑制表达内源性V600E或非V600突变形式BRAF的LA细胞系中的MAPK信号传导[2]。
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| 体内研究 |
PLX8394(150mg/kg/d)基本上抑制这些H1755异种移植肿瘤中的肿瘤生长,MAPK途径信号传导和肿瘤细胞增殖,而在小鼠中没有明显的毒性。 PLX8394与厄洛替尼联合使血浆厄洛替尼浓度>1μM[2]。
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| 细胞实验 |
对于MTT测定，将2×103个细胞在其常规培养基（含有PRX系的PLX4720）的96孔中一式三份接种。第二天，用PBS洗涤细胞两次，然后补充含有指定的RAF抑制剂的培养基。 48小时后更换培养基，再过48小时后，向孔中加入10μL5mg/ mL MTT试剂，并培养3小时。然后将Formazan晶体用1:10稀释的0.1M甘氨酸（pH 10.5）在DMSO中溶解过夜。然后在Multiskan®频谱分光光度计中以450nM分析孔。所描绘的结果归一化为DMSO条件，并且是三个独立实验的复合物。显示的误差棒代表平均值的标准误差（SEM）。
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| 动物实验 |
通过将50×50混合物中的5×10 6个细胞注射到基质胶和PBS中，产生H1755肿瘤异种移植物，产生6至8周龄的雌性NOD / SCID小鼠。一旦肿瘤达到150mm 3的平均大小，将小鼠随机分配到治疗组。 sc植入H1755细胞并使其生长至约200mm 3（植入后4周）。然后用载体，vemurafenib或PLX8394处理小鼠15天。每日口服强饲法的载体是PEG 400 [20％（体积/体积）]，生育酚聚乙二醇琥珀酸酯（TPGS）[5％（体积/体积）]，水[75％（体积/体积）]。将PLX8394溶解于PEG 400 [20％（体积/体积）]，TPGS [5％（体积/体积）]和水[75％（体积/体积）]中并在整个给药期间连续涡旋。每天通过口服强饲法给予PLX8394，剂量为150mg / kg /天。
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| 参考文献 |
[1]. Basile KJ, et al. Inhibition of mutant BRAF splice variant signaling by next-generation, selective RAF inhibitors. Pigment Cell Melanoma Res. 2014 May;27(3):479-484. [2]. Okimoto RA, et al. Preclinical efficacy of a RAF inhibitor that evades paradoxical MAPK pathway activation in protein kinase BRAF-mutant lung cancer. Proc Natl Acad Sci U S A. 2016 Nov 22;113(47):13456-13461
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