HBX 19818

HBX 19818 是一种泛素蛋白特异性蛋白酶 (USP7) 抑制剂,IC50 值为 28.1 μM。

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> 去泛素化酶

研究领域 >> 癌症

IC50: 28.1 μM (USP7)[1]

HBX 19818是USP7的抑制剂,IC50为28.1μM。 HBX 19818对USP8,USP5,USP10,CYLD,UCH-L1,UCH-L3或SUMO蛋白酶SENP1没有影响,IC50>200μM。 HBX 19818在人癌细胞中选择性抑制USP7,IC50为~6μM。此外,HBX 19818(1.5,4,12,36或100μM)抑制多泛素化p53的USP7去泛素化。与DMSO处理的对照细胞相比,HBX 19818(30μM)也导致USP7过量产生的HEK293细胞中Mdm2多泛素化形式显着更高水平。 HBX 19818以剂量依赖性方式抑制HCT116增殖,IC50为〜2μM[1]。

HBX 19818和HBX 28,258抑制一组去泛素化酶的能力，包括UCH-L3（13 pM），USP7（100 pM），USP8（1.36 nM），UCH-L1（2.5 nM），USP5（10 nM）使用UbAMC底物（300nM）测试USP20（10nM）和USP2（500pM）。使用SUMO1-AMC（750 nM），ZRR，还测试了HBX 19818和HBX 28,258对SENP1（80 pM），组织蛋白酶-B（100 pM）和caspase-3（100 pM）的酶活性的潜在影响。 -AMC（3μM）和DEVD-AMC（250nM）底物。所有酶均在USP7反应缓冲液（50 mM Tris-HCl [pH 7.6]，0.5 mM EDTA，5 mM DTT，0.01％Triton X-100和0.05 mg / mL血清白蛋白）中进行测试，但两种酶USP8除外（相同的缓冲液但pH8.8）和半胱天冬酶-3（100mM HEPES [pH7.5]，10％蔗糖和0.1％CHAPS）。将所有酶与DMSO或化合物（包括HBX 19818）在室温下预孵育30分钟，并通过添加目标底物引发酶促反应。将反应混合物在室温下温育1小时，并通过加入乙酸（100mM）终止反应。使用PHERAstar [1]监测反应。

通过在含有10μM5-溴-2-脱氧尿苷（BrdU）的培养基中孵育HCT116细胞30分钟来评估HCT116细胞增殖，所述培养基掺入增殖细胞的DNA中。然后通过胰蛋白酶处理收获细胞，通过离心收集，并将沉淀重新悬浮并在4℃下在70％乙醇中孵育30分钟。离心并除去上清液后，通过在室温下在2N HCl中孵育30分钟使DNA变性。然后通过流式细胞术确定含有BrdU的细胞的百分比，使得可以定量增殖细胞。用HBX 19818处理24小时后评估细胞周期，然后在4℃下将分离的细胞和胰蛋白酶化的细胞在70％乙醇中固定30分钟。然后将细胞在补充有1％BSA，0.5％吐温20,50μg/ mL RNase A和50μg/ mL碘化丙啶的PBS中于37℃温育30分钟。在FACSort荧光计上分析样品。使用Multicycle软件[1]计算细胞周期不同阶段的细胞百分比。

[1]. Reverdy C, et al. Discovery of specific inhibitors of human USP7/HAUSP deubiquitinating enzyme. Chem Biol. 2012 Apr 20;19(4):467-77.

BAY 11-7082 | P005091 | 2,6-二氨基-3,5-二硫氰基吡啶 | VLX1570 | (2E)-3-(6-溴-2-吡啶基)-2-氰基-N-[(1S)-1-苯基丁基]-2-丙烯酰胺 | 1-[5-[(2,4-二氟苯基)硫基]-4-硝基-2-噻吩基]乙酮 | 的DUB-IN-2 | ML364 | (3E,5E)-3,5-二[(4-硝基苯基)亚甲基]-1-(1-氧代-2-丙烯-1-基)-4-哌啶酮 | GEN6776 | ML-323 | 1-[1-(4-氟苯基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-基]-2-(1-吡咯烷基)乙酮 | LDN-57444 | 4-氰基-5-[(3,5-二氯-4-吡啶基)硫基]-N-[4-(甲基磺酰基)苯基]-2-噻吩甲酰胺