N,N-二异丙基乙胺（CAS 7087-68-5，C₈H₁₉N，DIPEA）的结构为 CH₃CH₂N(CH(CH₃)₂)₂，是位阻叔胺，共轭酸 pKaH 为 10.75。其氮原子孤对电子受到两个异丙基的空间保护，亲核性低，碱性足以质子化，沸点为 127 °C。这些性质决定它在液相色谱和液相色谱-质谱中的角色：流动相碱性改性剂、硅醇扫尾剂、离子对试剂和电荷调控剂。
一、HPLC中的用途
1. 碱性改性剂与硅醇扫尾剂
反相 HPLC 常用硅胶基质 C18 柱，固定相表面存在残余硅醇基。碱性分析物，包括含氮药物、生物碱和杂环胺，在中性至微酸性流动相中质子化，与硅醇基发生离子交换和氢键作用，产生峰拖尾、保留漂移和柱效下降。DIPEA 加入流动相后，其叔胺氮与硅醇基形成强相互作用，动态覆盖活性位点，降低碱性分析物与固定相的非特异性结合。DIPEA 的位阻效应使其不易进入硅胶孔内发生不可逆键合，也降低对分析物的亲核副反应。常用添加量为 0.05%–0.2%（体积分数）或 5–50 mmol/L。峰形改善来自竞争吸附和流动相 pH 调节的协同作用。
2. 离子对与保留调控
在低 pH 流动相中，DIPEA 质子化为 C₈H₂₀N⁺，作为阳离子离子对试剂与酸性分析物形成中性离子对，增加其在反相固定相上的保留。该作用用于分离有机酸、磷酸化合物和部分代谢物。DIPEA 与甲酸、乙酸形成挥发性缓冲体系，适用于 LC-MS 兼容的 HPLC 方法；与三氟乙酸联用时离子对效果强，但三氟乙酸抑制 ESI，LC-MS 中不优先采用。UV 检测中，DIPEA 在 210 nm 附近有末端吸收，检测波长低于 220 nm 时需进行基线补偿或降低添加剂浓度。
二、LC-MS中的用途
1. 寡核苷酸和磷酸化合物的离子对反相 LC-MS
DIPEA 在 LC-MS 中最具代表性的用途是与 1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇（HFIP）组成离子对流动相，用于寡核苷酸、磷酸肽和磷酸化代谢物的反相分离与负离子 ESI 检测。HFIP 提供弱酸性环境，DIPEA 提供位阻阳离子。DIPEA 阳离子与磷酸骨架负电荷形成离子对，降低分析物极性和多电荷排斥，增加反相保留。离子对形成后，寡核苷酸峰形变窄，钠加合物减少，负离子 ESI 谱图中电荷分布更集中，信号强度提高。DIPEA 和 HFIP 均具有挥发性，在离子源高温和真空条件下从液滴中脱除，保持质谱背景可控。该体系已成为寡核苷酸纯度分析和序列解析的常规选择。
2. 电荷调控与离子抑制边界
DIPEA 的质子亲和力高。在正离子 ESI 中，DIPEA 与M+H⁺ 竞争质子，降低碱性分析物的离子化效率，因此正离子模式流动相中 DIPEA 浓度必须严格控制，在通用正离子方法中不作为添加剂。在负离子模式中，DIPEA 作为离子对阳离子发挥作用，通过中和酸性分析物负电荷、减少钠加合物和稳定喷雾液滴，提升检测重复性。DIPEA 浓度过高会提高背景化学噪声并压制分析物信号，浓度优化以 mmol/L 级为起点，与 HFIP 比例联动调整。
三、方法学操作逻辑
方法开发先判断分析物性质和检测模式。碱性分析物在硅胶 C18 柱上拖尾时，DIPEA 作为流动相扫尾剂；酸性或磷酸化分析物在负离子 LC-MS 中需要离子对保留和电荷调控时，DIPEA 与 HFIP 联用。HPLC-UV 方法中，DIPEA 浓度控制在 0.05%–0.2%，并避开低波长末端吸收干扰。LC-MS 方法中，DIPEA 浓度控制在 mmol/L 级，优先采用负离子模式，正离子模式仅在不影响目标离子化的特定方法中使用。DIPEA 的位阻结构使其在流动相中稳定，减少固定相污染，但高浓度会改变保留时间、pH 和离子化效率，需通过空白梯度和标准品响应验证。
四、结论
N,N-二异丙基乙胺在 HPLC 中的核心价值是碱性改性、硅醇扫尾和离子对保留调控；在 LC-MS 中的核心价值是与 HFIP 等挥发性酸组成离子对体系，用于寡核苷酸和磷酸化合物的负离子检测，改善峰形、减少加合物并集中电荷分布。其位阻叔胺结构、pKaH 10.75 和挥发性共同决定这些用途。正离子 ESI 中 DIPEA 产生质子竞争和离子抑制，使用浓度必须低。方法建立时围绕分析物酸碱性、固定相硅醇活性和检测模式进行优化，即可发挥 DIPEA 在分离与质谱检测中的双重作用。