N-(对甲苯磺酰)-L-苯丙氨酸（CAS号：13505-32-3），简称Tos-Phe-OH或Ts-Phe-OH，是一种常见的保护氨基酸衍生物。它由L-苯丙氨酸（Phe）的氨基与对甲苯磺酰氯（TsCl）反应生成，分子式为C₁₆H₁₇NO₄S。结构上，对甲苯磺酰基（Tosyl，Ts）作为N-端保护基团，连接在苯丙氨酸的α-氨基上，而羧基则保持自由状态。这种化合物在有机合成和生物化学领域广泛应用，尤其在多肽合成的策略设计中扮演关键角色。
从化学专业视角来看，Tos-Phe-OH的引入源于对氨基酸侧链和功能团的保护需求。在肽合成过程中，未保护的氨基酸易于发生副反应，如自缩合或与溶剂反应，导致产率低下或产物杂质增多。Tosyl基团的磺酰胺结构提供了一种稳定的保护形式，具有良好的选择性和去保护条件，这使其成为经典的保护策略之一。
在肽合成中的主要作用
作为N-端保护的构建模块
在肽合成中，Tos-Phe-OH的主要作用是作为N-端保护的氨基酸单元，用于构建肽链的序列化组装。肽合成通常采用溶液相或固相方法（如Merrifield固相肽合成，SPPS），其中N-保护氨基酸是核心原料。Tos-Phe-OH可通过其自由羧基与下游氨基酸的N-端形成肽键，同时Tosyl基团阻断上游反应，确保合成方向性。
具体而言，在溶液相合成中，Tos-Phe-OH先被活化（如使用DCC/DMAP或EDC/HOBt偶联剂），然后与C-端保护的氨基酸（如Boc-Gly-OMe）反应生成二肽Tos-Phe-Gly-OMe。随后，通过选择性去保护（如使用HBr/AcOH或HF处理）暴露新的N-端，继续延伸链条。这种步进式策略允许精确控制肽链长度和序列，避免了随机聚合的风险。
在固相肽合成（SPPS）中，Tos-Phe-OH可锚定到树脂（如Wang树脂或MBHA树脂）上，作为起始单元。Tosyl的稳定性使其适合Fmoc或Boc策略的变体，尽管Fmoc/tBu更流行，但Tosyl在某些耐酸条件下仍被使用，尤其当序列包含苯丙氨酸残基时，其芳香侧链可增强肽的疏水性或生物活性。
保护基团的化学机制
Tosyl基团的保护机制依赖于其电子吸引效应。磺酰胺的N-S键形成后，α-氨基的亲核性显著降低，无法参与未期望的酰胺化反应。同时，Tosyl的芳香环提供立体屏障，进一步抑制副反应。去保护通常在酸性条件下进行：例如，使用氢氟酸（HF）或三氟乙酸（TFA）/苯酚混合物，可裂解Tos基团，释放游离氨基，而不影响肽键或侧链保护（如酯或Bzl）。
从量子化学角度，Tosyl的共轭体系稳定了电子密度分布，使其在碱性条件下不易水解，但对强酸敏感。这种选择性是其在多步合成中受欢迎的原因。相比其他N-保护基如Boc（叔丁氧羰基）或Cbz（苯甲氧羰基），Tosyl更耐碱，且去保护不产生二氧化碳气体，避免了气泡干扰。
应用实例与优势
Tos-Phe-OH在合成生物活性肽中的应用广泛。例如，在制备胃泌素（gastrin）或物质P（substance P）等含苯丙氨酸序列的肽激素时，它作为关键模块，确保Phe残基的正确插入。这些肽常用于药物开发，如抗癌或神经调控剂。
其优势包括：
- 高稳定性：耐受多种偶联条件，如水溶性碳二亚胺（WSC）或磷杂偶氮鎓试剂（PyBOP），适用于大规模合成。
- 经济性：Tosyl保护剂廉价易得，苯丙氨酸来源丰富。
- 兼容性：与丝氨酸或苏氨酸的O-保护基（如Tos也可用于侧链）兼容，避免交叉干扰。
然而，也存在局限性。Tosyl去保护需强酸，可能导致敏感残基（如Met或Trp）氧化或脱氨基化。为此，现代合成常转向Fmoc策略，但Tos-Phe-OH在教育实验或经典文献中仍具参考价值。此外，在手性纯度控制上，L-构型确保了肽的生物活性，而D-异构体可能引入毒性。
实验注意事项
合成Tos-Phe-OH时，通常在碱性条件下（如NaOH/二氧六环）反应TsCl与Phe，避免racemization。纯化采用柱色谱或重结晶，NMR验证结构（¹H NMR显示芳香信号在7.2-7.8 ppm）。在肽合成应用中，监控HPLC纯度至关重要，以确保>95%的产率。
总之，N-(对甲苯磺酰)-L-苯丙氨酸作为保护氨基酸，在肽合成中提供可靠的N-端屏蔽和序列构建功能。其经典地位源于化学稳定性和操作简便性，尽管被更现代方法部分取代，但仍为专业化学家在设计合成路线时的重要工具。通过优化条件，可显著提升肽产物的纯度和生物效价。