西布曲明的生物活性

西布曲明是一种新型的 5-HT (serotonin) 和去甲肾上腺素再摄取抑制剂 (SNRI)。Sibutramine 抑制电压门控 K+ 通道 KV4.3，IC50 为 17.3 μM。它的生物活性如下：

一、西布曲明生物活性
1）体外活性：
西布曲明是一种新型5-HT（血清素）和去甲肾上腺素再摄取抑制剂（SNRI）。 西布曲明减少啮齿动物的食物摄入量，通过用5-HT或去甲肾上腺素拮抗剂预处理可部分或完全逆转这种作用，表明两种神经递质均参与西布曲明的食欲减退[1]。 西布曲明引起KV1.3和KV3.1电流的浓度依赖性阻断，IC50分别为3.7和32.7μM。 西布曲明以浓度依赖性方式降低KV1.3和KV3.1的稳态电流，IC50分别为3.7±0.7（n = 6）和32.7±5.0μM（n = 5）[2]。
2）体内活性
西布曲明（SIB）（5 mg / kg ip）阻断5-羟色胺（5-HT）和去甲肾上腺素（NA）的再摄取，也需要ARC pro-opiomelanocortin（POMC）神经元在男性和女性中实现其食欲效应。 雌性老鼠。 在年轻成年和中年男性和女性POMC-EGFP小鼠中，西布曲明（5 mg / kg）可抑制3小时黑暗循环食物摄入量[3]。 在正常Wistar大鼠中，3mg / kg西布曲明在给药的第一天产生显着（~30％）的食物摄入抑制。 与公布的数据一致，西布曲明对食物摄入的影响随着时间的推移而减少，尽管西布曲明治疗（213.3±5.7 g）的9天研究中累积食物摄入量显着（P <0.001）低于媒介物治疗（ 260.2±3.0g）大鼠。 西布曲明还显着降低了整体体重增加（载体30±2 g，西布曲明14±3 g; P <0.001）[4]。

二、西布曲明生物活性的实验方法
1）激酶测定
将西布曲明溶解在浴液中，得到30mM储备溶液。使用Lipofectamine试剂将KV4.3，KV1.3和KV3.1 cDNA稳定转染到CHO细胞中。将CHO细胞维持在Iscove改良的Dulbecco培养基中，该培养基在37℃下在潮湿的5％CO2培养箱中补充有10％胎牛血清，0.1mM次黄嘌呤和0.01mM胸苷。将转染的细胞与含有0.3mg / mL遗传霉素（G-418）的新鲜Iscove改良的Dulbecco培养基交换，并使用简短的胰蛋白酶-EDTA处理以2至3天的间隔通过。在使用前1天，将细胞解离并接种在35mm培养皿中的玻璃盖玻片（直径12mm）上。对于电生理学实验，将带有附着细胞的盖玻片转移到记录室（RC-13）。在室温（22-24℃）下用常规外部溶液以0.5mL / min的速率对腔室进行超融合。 Origin 7.0软件程序用于分析。浓度 - 响应数据符合以下Hill方程式：y = 1 /（1 +（[D] / IC50）n），其中IC50是产生50％嵌段所需的西布曲明浓度，[D]是西布曲明的浓度，和希尔系数。

2）动物实验
小鼠-将POMCfneo / fneo和野生型同窝仔畜和POMC-EGFP年轻成年小鼠和中年成年小鼠在实验前单独饲养1周，并在实验前1天接受腹膜内ip注射载体。然后在黑暗周期开始前45分钟用载体，氯卡色林（8mg / kg），D-芬氟拉明（3mg / kg）或西布曲明（5mg / kg）处理小鼠（在上午7:00点亮）。并在晚上7点关闭）食物被移除。在黑暗周期开始时，更换食物颗粒并测量3至4小时的食物摄入量。这些研究使用受试者内部实验设计进行，至少3天无治疗期。
大鼠-使用雄性Wistar和肥胖（fa / fa）Zucker大鼠（ZuckerfLIS / Alpkh）。使用Sprague-Dawley大鼠。每天两次（在06:00和16:00）给予NPY5RA-972（10mg / kg，n = 7）或载体（n = 6）两次（p.o.）。在开始给予化合物开始前3天，​​大鼠习惯于仅用载体处理和给药。每天测量食物摄入量和体重。接受西布曲明的阳性对照组（n = 7）包括在慢性研究中。西布曲明是一种市售的食欲抑制药物，主要通过抑制5-羟色胺和去甲肾上腺素的再摄取来起作用。西布曲明以每天3mg / kg（16:00 h）给药。西布曲明治疗的大鼠也接受一剂载体（在06:00 h）以维持所有组的程序的一致性。

参考文献：
[1]. Heal DJ, et al. Sibutramine: a novel anti-obesity drug. A review of the pharmacological evidence to differentiate it from d-amphetamine and d-fenfluramine. Int J Obes Relat Metab Disord. 1998 Aug;22 Suppl 1:S18-28; discussion S29.
[2]. Kim SE, et al. Open channel block of A-type, kv4.3, and delayed rectifier K+ channels, KV1.3 and KV3.1, bySibutramine. J Pharmacol Exp Ther. 2007 May;321(2):753-62.
[3]. Burke LK, et al. 5-HT obesity medication efficacy via POMC activation is maintained during aging. Endocrinology. 2014 Oct;155(10):3732-8.
[4]. Turnbull AV, et al. Selective antagonism of the NPY Y5 receptor does not have a major effect on feeding in rats. Diabetes. 2002 Aug;51(8):2441-9.