普瑞色替的作用 - 生物活性 - 靶点活性

普瑞色替，英文名Prexasertib，别名LY2606368，CAS号是1234015-52-1，它是一种有效的，选择性的，ATP 竞争性的 Chk1 抑制剂，Ki 值为 0.9 nM，对 CHK1 和 CHK2 的 IC50 值分别为 <1 nM 和 8 nM。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍普瑞色替的生物活性：

1）体外活性
普瑞色替是Chk1的有效和选择性ATP竞争性抑制剂，IC50 <1 nM，并且还抑制CHK2，IC50为8 nM。普瑞色替通过丝氨酸296的自磷酸化对CHK1活性具有1nM的EC50，对于HT-29CHK2自磷酸化具有<31nM（S516）。普瑞色替有效地消除了p53缺陷型HeLa细胞中多柔比星激活的G2-M检查点，EC50为9 nM。

然而，100nM 普瑞色替不抑制PMA刺激的RSK，而是弱刺激丝氨酸235/236上S6的磷酸化。普瑞色替广泛抗增殖，对U-2 OS，Calu-6，HT-29，HeLa和NCI-H460细胞系的IC50分别为3nM，3nM，10nM，37nM和68nM。普瑞色替（4 nM）导致细胞周期群体从G1和G2-M向S期的大幅度转变，伴随着U-2 OS细胞中H2AX磷酸化的诱导[1]。

普瑞色替（25μM）表现出对AGS和MKN1细胞增殖的抑制活性。普瑞色替（20nM）抑制HR修复能力DR-GFP细胞。普瑞色替（5 nM）与PARP抑制剂BMN673联合使用，在胃癌细胞中显示出协同抗癌作用[2]。

2）体内活性
普瑞色替（15 mg / kg，s.c。）显着抑制异种移植肿瘤模型中的肿瘤生长，动物体重减轻较少[1]。普瑞色替（2 mg / kg，s.c。）和BMN673组合在胃癌PDX模型中具有协同抗癌作用，其效果高于单独一种药物[2]。

我们已经了解了普瑞色替的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的两种方法：

1）细胞实验
通过MTS细胞增殖比色测定试剂盒检测Chk1消融，IR敏感性，BMN673和普瑞色替的抗癌作用的增殖抑制作用。将细胞接种到96孔细胞培养板中，然后用指定的实验条件处理，然后向每个孔中加入20μLMTS试剂，培养2小时后，在酶标仪上以490nM的波长检测每个孔的细胞活力。[2]。

2）动物实验
雌性CD-1 nu- / nu-小鼠（26-28g）用于该研究。通过在每只受试动物的后胁腹中的无血清生长培养基和基质胶的1：1混合物中皮下注射1×106Calu-6细胞来开始肿瘤生长。当肿瘤体积达到约150mm 3时，通过肿瘤大小和体重随机化动物，并将其置于它们各自的治疗组中。

由20％Captisol pH4或普瑞色替组成的载体通过皮下注射以200μL的体积施用。给药后4,8,12,24和48小时，通过心脏穿刺提取用于血浆药物暴露的血液，并在Sciex API 4000 LC / MS-MS系统上进行测定。迅速移除并准备异种移植组织。通过蛋白质磷酸化水平的免疫印迹分析来分析裂解物。组均值，SE和P值使用Kronos计算。

今天介绍了普瑞色替的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，普瑞色替Prexasertib是具有潜在抗肿瘤活性的检查点激酶1（chk1）的抑制剂。它的靶点活性是Chk1，Chk2。

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参考文献：
[1]. King C, et al. LY2606368 Causes Replication Catastrophe and Antitumor Effects through CHK1-Dependent Mechanisms. Mol Cancer Ther. 2015 Sep;14(9):2004-1
[2]. Yin Y, et al. Chk1 inhibition potentiates the therapeutic efficacy of PARP inhibitor BMN673 in gastric cancer. Am J Cancer Res. 2017 Mar 1;7(3):473-483.