| 描述 |
WWL70 是一个选择性的 α/β 水解酶结构域 6 (ABHD6) 抑制剂,其 IC50 值为 70 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 70 nM (ABHD6)[1]
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| 体外研究 |
在WWL70(10μM)处理后1小时,与未处理的细胞相比,2-花生四烯酰甘油(2-AG)增加20％。在1或10μM时,WWL70完全阻断脂多糖(LPS)诱导的PGE2增加。 WWL70也降低了LPS对mPGES-1和mPGES-2 mRNA表达的增强作用。 WWL70抑制PGE2生物合成的IC50约为100 nM [2]。
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| 体内研究 |
尽管用5mg/kg的WWL70进行后处理没有任何效果,但用10mg/kg的WWL70处理显着改善了性能。 WWL70治疗以浓度依赖性方式改善创伤性脑损伤(TBI)小鼠的运动协调。用WWL70以5mg/kg处理的动物的下降潜伏期从第3天的74.92±4.8增加到99.57±5.21(p <0.01),并且在第7天(p <0.05)从87.32±4.42增加到100.14±3.56(p <0.05)。与车辆TBI组相比,受伤。在10mg/kg时,WWL70治疗在损伤后第1天开始改善运动协调。 WWL70治疗完全恢复了TBI小鼠在Y迷宫探查期间连续交替手臂的能力(69.67±4.98％)[3]。
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| 激酶实验 |
将100微克/毫升BV2微粒体与WWL70在23℃预温育5分钟，然后在10℃下与10μM花生四烯酸（AA）在23℃下混合1分钟。将500μg/ mL脑微粒体与10μMAA在23℃下孵育2分钟。通过与亚锡酸（在0.1N HCl中5mg / mL）混合以使酶失活并将中间体PGH2转化为PGF2α，然后通过酶联免疫测定（EIA）测量PGE2浓度来终止反应。在减去微粒体组分中没有底物的PGE2的量减去后确定活性[2]。
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| 细胞实验 |
用WWL70（10μM）处理10-cm培养皿中的BV2细胞（90％汇合）1小时。用PBS冲洗一次后，通过以5000g离心2分钟收集细胞。通过移液将沉淀物用0.1mL的0.02％三氟乙酸（TFA）和1nmol的2-AG-d8悬浮，并在硅烷化的玻璃管中分散在4mL的乙腈中，以在-20℃下将碎片沉淀过夜。将上清液以5000g离心5分钟后，转移到新的玻璃管中，在温和的热水浴（约35℃）中在氮气流下蒸发。将2-AG用0.1mL乙腈重悬，并储存在-80℃直至质量分析[2]。
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| 动物实验 |
在该研究中使用体重为25至30g的7周龄雄性C57BL / 6小鼠。将动物保持在温度为23±2℃，12小时光照/黑暗循环的受控环境中，并随意获得食物和水。生理盐水中WWL70（5 mg / kg或10 mg / kg）或等体积的1％DMSO生理盐水（10 mL / kg）腹腔注射，然后每天一次，连续3,7或21天，具体取决于实验设计。在21天治疗方案期间，动物在不同时间点进行一系列行为测试。在损伤后第21天最后一次注射后2小时，处死动物并收集脑组织用于组织学分析[3]。
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| 参考文献 |
[1]. Li W, et al. A functional proteomic strategy to discover inhibitors for uncharacterized hydrolases. J Am Chem Soc. 2007 Aug 8;129(31):9594-5. [2]. Tanaka M, et al. WWL70 attenuates PGE2 production derived from 2-arachidonoylglycerol in microglia by ABHD6-independent mechanism. J Neuroinflammation. 2017 Jan 10;14(1):7. [3]. Tchantchou F, et al. Selective inhibition of alpha/beta-hydrolase domain 6 attenuates neurodegeneration, alleviates blood brain barrier breakdown, and improves functional recovery in a mouse model of traumatic brain injury. J Neurotrauma. 2013 Apr 1;30(7):565-79.
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