| 描述 |
NBI-74330 是一种有效的 CXCR3 拮抗剂,能够抑制 (125I)CXCL10 和 (125I)CXCL11 的特异性结合,Ki 值分别为 1.5 和 3.2 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
[125I]CXCL10-CXCR3:1.5 nM (Ki, in CXCR3-CHO cell membranes)
[125I]CXCL11-CXCR3:3.2 nM (Ki, in CXCR3-CHO cell membranes)
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| 体外研究 |
BI-74330证明有效抑制[125 I] CXCL11特异性结合由表达CXCR3(CXCR3-CHO)的转染CHO细胞(Ki = 3.6nM)制备的膜。在抑制[125I] CXCL11与CXCR3-CHO细胞膜的结合时,NBI-74330的效力分别比CXCL9(Ki = 45.2nM)和CXCL10(Ki = 12.5nM)高12倍和3.5倍。 NBI-74330响应CXCL11和CXCL10抑制钙动员,对于在其EC80浓度下使用的两种配体,IC50值为7nM(对于CXCL11为1nM,对于CXCL10为30nM)。 NBI-74330特异性抑制CXCR3介导的钙动员。 NBI-74330还剂量依赖性地抑制CXCL11诱导的[35S]GTPγS在内源性表达CXCR3的细胞膜中的结合(H9细胞,IC50值5.5nM)。 BI-74330在这些细胞中抑制CXCL11诱导的趋化性,IC50为3.9 nM [1]。 NBI-74330(30-300 nm,1-10μM)产生CXCL11 E/[A]曲线的浓度依赖性平行向右移位,而E/[A]曲线最大响应没有显着变化[2]。
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| 体内研究 |
NBI-74330(100 mg/kg)导致小鼠中形成N-氧化物代谢物,也是CXCR3的拮抗剂[2]。用100mg/kg NBI-74330(在1％Na Doc中的0.5％400Cp甲基纤维素中)处理的小鼠产生约1μM的血清浓度。该浓度足以在体内完全阻断CXCR3受体[3]。
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| 激酶实验 |
将细胞膜级分重悬于50mM HEPES，10mM MgCl 2,100mM NaCl和1mM CaCl 2，pH 7.2中，用于竞争性放射性配体结合反应。反应一式两份进行，由指定浓度的25-μL未标记趋化因子组成，25-μL放射性标记的趋化因子配体（约70nM; [125 I] CXCL11和[125 I] CXCL10，比活性分别为1500和2200Ci / mmol;将50μL膜蛋白（5μg）依次加入到测定缓冲液（50mM HEPES，10mM MgCl 2,100mM NaCl，1mM CaCl 2和0.1％BSA，pH 7.2）中至低结合96孔板中。通过在室温下孵育45分钟同时振荡使反应达到平衡。结合的放射性配体的量通过使用UniFilter-96真空歧管通过UniFilter GF / C滤板过滤来收集膜（过滤器用1预处理）用聚乙烯亚胺％洗涤，用400μL洗涤缓冲液（10mM HEPES，5mM MgCl 2,1mM CaCl 2和500mM NaCl，pH 7.3）洗涤两次，并使用TopCount NXT通过液体闪烁测量放射性。解离半衰期[125 I]使用CXCR3-CHO me测量CXCL11在存在或不存在不同浓度的NBI-74330的情况下，在加入过量冷CXCL11（最终31nM）之前，允许用放射性标记（约70nM）平衡30分钟。膜结合的[125 I] CXCL11一式两份地评估，同时在同一平板上的每个时间点进行非特异性结合（[125 I] CXCL11加上过量加入的冷CXCL11）和总结合（[125 I] CXCL11，无抑制剂）。
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| 动物实验 |
雌性LDLr - / - 小鼠，10周龄（每组8至12只），在放置衣领前2周喂食含有0.25％胆固醇和15％可可脂的西式饮食。在整个实验期间，每天皮下注射100mg / kg NBI-74330处理小鼠。在西式饮食和治疗8周后，对小鼠实施安乐死并收获器官用于组织学，荧光激活细胞分选仪（FACS）分析和RNA分离。通过来自非禁食动物的尾部出血收集血液样品，并使用酶比色法测定血清胆固醇和甘油三酯的浓度。
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| 参考文献 |
[1]. Heise CE, et al. Pharmacological characterization of CXC chemokine receptor 3 ligands and a small molecule antagonist. J Pharmacol Exp Ther. 2005 Jun;313(3):1263-71. [2]. Jopling LA, et al. Analysis of the pharmacokinetic/pharmacodynamic relationship of a small molecule CXCR3 antagonist, NBI-74330, using a murine CXCR3 internalization assay. Br J Pharmacol. 2007 Dec;152(8):1260-71. [3]. van Wanrooij EJ, et al. CXCR3 antagonist NBI-74330 attenuates atherosclerotic plaque formation in LDL receptor-deficient mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2008 Feb;28(2):251-7.
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