| 描述 |
EOAI3402143 是一种去泛素化酶 (DUB) 抑制剂,抑制 Usp9x/Usp24 和 Usp5,这种作用存在剂量依赖性。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
Usp5[1] Usp9x[1][2][3] Usp24[2]
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| 体外研究 |
EOAI3402143保留了强效的Usp9x和Usp5抑制活性[1]。 EOAI3402143剂量依赖性地抑制Usp9x和Usp24活性,增加肿瘤细胞凋亡[2]。用Usp9x抑制剂EOAI3402143(G9)处理UM-2,UM-6,UM-16和UM-76剂量依赖性地抑制细胞存活,而与未处理的载体相比,600nM的EOAI3402143完全抑制UM-2 3D集落生长。控制[3]。
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| 体内研究 |
为了检验这种潜力,研究了EOAI3402143(G9)治疗对人MIAPACA2肿瘤异种移植物的作用。将人MIAPACA2细胞皮下注射到NSG小鼠中。通过卡尺测量监测原发性肿瘤发展,并且一旦可测量,将小鼠分成两组并用载体对照(PEG300/DMSO)或15mg/kg的G9处理。在治疗期间监测肿瘤生长,动物体重,行为和活动性。同时,还建立鼠8041肿瘤,并进行与人MIAPACA2异种移植物相似的G9处理和肿瘤监测方案。与体外发现一致,Usp9x抑制导致人肿瘤异种移植物中肿瘤生长的抑制,但未观察到对8041肿瘤异种移植物生长的任何显着影响,尽管在人MIAPACA2中EOAI3402143处理有效抑制Usp9x活性。和小鼠8041异种移植肿瘤[3]。
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| 细胞实验 |
在指定浓度的EOAI3402143（1,2,3,4和5μM）存在下，将UM-2，UM-6，UM-16和UM-76细胞以每孔5000个接种于96孔板中）在37℃的CO2培养箱中培养3天。向每个孔中加入20微升5g / L MTT溶液，在37℃下保持2小时。然后将细胞在10％SDS缓冲液中裂解，用酶标仪测定相对于参比波长630nm在570nm处的吸光度。为了使用MTT测定检查增殖，将细胞一式三份接种，并在第0,1,2,3和4天处理样品用于MTT测定[3]。
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| 动物实验 |
小鼠[3] NSG [NOD / SCID / IL2r-g（无效）]小鼠在背部中部注射2×106 8041或5×106 MIAPACA2细胞在0.1mL Matrigel / DMEM悬浮液中。允许肿瘤建立至约100mm 3，之后小鼠肿瘤大小匹配，并且对于8041个荷瘤小鼠，每个治疗组（载体或EOAI3402143）分配5个，对于MIAPACA2荷瘤小鼠，每个治疗组分配4个。 EOAI3402143以DMSO：PEG300（1：1）以15mg / kg每隔一天腹膜内注射给药。通过卡尺测量每周两次监测肿瘤大小，并计算肿瘤体积[3]。
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| 参考文献 |
[1]. Potu H, et al. Usp5 links suppression of p53 and FAS levels in melanoma to the BRAF pathway. Oncotarget. 2014 Jul 30;5(14):5559-69. [2]. Peterson LF, et al. Targeting deubiquitinase activity with a novel small-molecule inhibitor as therapy for B-cell malignancies. Blood. 2015 Jun 4;125(23):3588-97. [3]. Pal A, et al. Usp9x Promotes Survival in Human Pancreatic Cancer and Its Inhibition Suppresses Pancreatic Ductal Adenocarcinoma In Vivo Tumor Growth. Neoplasia. 2018 Feb;20(2):152-164.
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