| 描述 |
AZD3965是选择性的 MCT1 抑制剂,Ki 值为1.6 nM,比MCT2的选择性高6倍。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
Ki: 1.6 nM (MCT1)[1]
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| 体外研究 |
AZD3965设计用于选择性抑制单羧酸转运蛋白-1(MCT1),因此预计会影响乳酸进出细胞的运动[1]。 AZD3965处理导致缺氧COR-L103细胞内乳酸增加3.7倍,常氧和缺氧NCI-H1048细胞增加3.7倍和3.9倍。在所有其他情况下,观察到<1.9倍的增加。这些数据与AZD3965在细胞中阻断乳酸转运是一致的,其中AZD3965也减少细胞数量并且与通过抑制MCT1起作用的AZD3965一致。当MCT1过表达时,NCI-H1048的EC50在NCI-H1048细胞中从0.14nM增加至10.5nM。这与通过MCT1抑制作用的AZD3965一致[2]。
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| 体内研究 |
将携带COR-L103肿瘤的小鼠用100mg/kg AZD3965或载体BID处理21天,并监测肿瘤体积。药代动力学分析表明,100mg/kg AZD3965 BID导致预测的游离AZD3965浓度抑制乳酸转运。 AZD3965治疗显着降低了COR-L103肿瘤的生长,但未见肿瘤消退,与仅针对肿瘤缺氧部分的AZD3965一致[2]。
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| 激酶实验 |
将细胞过夜接种并用100nM AZD3965或载体处理24小时。然后将细胞用PBS洗涤一次，用裂解缓冲液（50mM Mops，100mM KCl，5mM MgCl 2,1mM EDTA，0.1mM DTT，1mM PMSF补充1×mini完全蛋白酶抑制剂混合物片剂）洗涤两次。通过刮擦和离心收获细胞，将沉淀物在液氮中不用缓冲液快速冷冻。将冷冻的等份细胞在冰上解冻并重悬于裂解缓冲液中。细胞在液氮中冷冻3轮并在37℃解冻。每次2分钟，然后将裂解物离心（13000g，10分钟，4℃）直至澄清，然后储存在冰上。使用微量板读数器测定细胞裂解物中的酶活性，以测量细胞裂解物的产生或消耗。 NADH / NADPH通过其在340/10 nm处的吸光度，由于直接或偶联酶反应而发生。用于测定的96孔板在开始反应之前预热至37℃10分钟，由将5μL细胞裂解液加入到95μL中反应缓冲液（50mM Mops pH 7.4,100mM KCl，5mM游离镁）。补充标准反应缓冲液以测定不同酶的动力学。从相应反应的吸光度中减去对照的吸光度值。 Graphpad棱镜6用于绘制V0值与底物浓度的关系，并确定Vmax和Km值。然后将Vmax标准化为细胞裂解物中的蛋白质浓度[1]。
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| 动物实验 |
小鼠[2] COR-L103异种移植物通过将5×10 6个细胞在0.2mL 1：1无血清RPMI：基质胶中皮下注射到8至14周龄雄性NOD scid gamma小鼠的中背侧生长。 。将小鼠置于12小时光照/ 12小时黑暗环境中的单独通风的笼养系统中，并保持在均匀的温度和湿度下。使用卡尺每周测量肿瘤大小两次，并且以肿瘤长度×肿瘤宽度2/2计算体积。植入后30天，将携带150至250mm 3肿瘤的小鼠随机分成两组，每组6只，并用0.5％羟丙基甲基纤维素，0.1％吐温80或载体中的100mg / kg BID AZD3965仅通过口服强饲法处理21天。在药物治疗期间每周持续测量3次，以评估肿瘤生长动力学。在处死时，收集肿瘤以确定肿瘤内乳酸盐浓度。
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| 参考文献 |
[1]. Bola BM, et al. Inhibition of monocarboxylate transporter-1 (MCT1) by AZD3965 enhances radiosensitivity by reducing lactate transport. Mol Cancer Ther. 2014 Dec;13(12):2805-16. [2]. Polanski R, et al. Activity of the monocarboxylate transporter 1 inhibitor AZD3965 in small cell lung cancer. Clin Cancer Res. 2014 Feb 15;20(4):926-37.
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