| 描述 |
RGFP966 是高选择性的 HDAC3 抑制剂,IC50 为 80 nM。在15 μM时对其他HDAC无抑制作用。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
HDAC3:80 nM (IC50)
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| 体外研究 |
RGFP966在RAW 264.7巨噬细胞中有效且选择性地抑制HDAC 3,IC50为0.21μM,而HDAC 1(IC50 =5.6μM),2(9.7μM)和8(>100μM),表明对HDAC 3具有良好的选择性水平。在RAW 264.7巨噬细胞中,HDAC 1,2和3的mRNA水平不受RGFP966的显着影响,而HDAC 1和HDAC 2蛋白水平在RGFP966处理后略微降低,但显着降低。此外,RGFP966显着降低NF-κBp65的转录活性,而NF-κBp65乙酰化和定位保持不变[2]。
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| 体内研究 |
RGFP966(10和25 mg/kg)治疗在开放式野外运动试验中显着改善了体重,旋转杆性能和几种运动功能测量[3]。 10mg/kg剂量的RGFP966以典型的药代动力学渗透到大脑听觉皮层的血脑屏障,这共同建立了由于听觉皮层中的作用而调节A1可塑性的可行性[4]。
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| 激酶实验 |
将各种人重组HDAC酶在不存在和/或存在各种浓度的RGFP966和促荧光底物的情况下在室温下孵育60分钟。接下来，通过在所有孔中添加HDAC终止溶液（6mg / mL胰蛋白酶，0.3mM SAHA）来终止脱乙酰化反应，并将板在37℃下孵育20分钟。通过使用Synergy H1平板读数器测量λem= 460nm和λex= 390nm处的荧光来监测荧光7-氨基-4-甲基香豆素的释放。从阳性对照，空白和抑制孔的荧光中减去背景孔的荧光值。非线性回归用于使用GraphPad Prism [2]将数据拟合到log（抑制剂）与响应曲线。
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| 细胞实验 |
为了研究HDAC3选择性抑制剂RGFP966对细胞活力的影响，将RAW 264.7巨噬细胞，HBE细胞和hASM细胞接种在96孔板中。为了在实验开始时获得相同的细胞密度，将RAW 264.7巨噬细胞以25,000个细胞/ cm 2接种，将HBE细胞和hASM细胞以70％汇合（基于表面积）接种，并在孵育前血清饥饿24小时。与RGFP966。在与RGFP966温育之前不久，用100μL新鲜（如果合适的无血清）培养基替换培养基。如通过siRNA对HDAC1-3下调所述进行与LPS和IFNγ的孵育。与RGFP966温育20小时后，向每个孔中加入20μLCellTiter96 AQueous One Solution试剂，并在黑暗中于37℃温育1小时。使用Synergy H1读板仪测量490nm处的吸光度。没有添加RGFP966的LPS /IFNγ刺激的细胞被认为是100％[2]。
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| 动物实验 |
将小鼠[3] N171-82Q转基因小鼠圈养并保持在正常的12小时光照/黑暗循环中，并在上午6:00点亮并且自由获取食物和水。从8周龄开始，通过SC注射（3次注射/周）给小鼠施用RGFP966（10或25mg / kg）10周。用75％聚乙二醇200/25％乙酸钠（6.25mM）溶解RGFP966;对照小鼠接受等量的药物载体。体重每周记录两次。在最后一次注射后6小时，通过过量使用异氟烷麻醉处死小鼠18周龄。取出脑，解剖出纹状体和皮质用于基因表达测定或用4％多聚甲醛心脏内灌注。大鼠[4]使用总共三十三只成年雄性Sprague Dawley大鼠（275-350g）。在每日训练期之后，立即向每个受试者递送RGPF966（10mg / kg，sc）或媒介物（与药物治疗相当的体积）的训练后全身注射。
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| 参考文献 |
[1]. Malvaez M, et al. HDAC3-selective inhibitor enhances extinction of cocaine-seeking behavior in a persistent manner. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Feb 12;110(7):2647-52. [2]. Leus NG, et al. HDAC 3-selective inhibitor RGFP966 demonstrates anti-inflammatory properties in RAW 264.7 macrophages and mouse precision-cut lung slices by attenuating NF-κB p65 transcriptional activity. Biochem Pharmacol. 2016 May 15;108:58-74. [3]. Jia H, et al. The Effects of Pharmacological Inhibition of Histone Deacetylase 3 (HDAC3) in Huntington's Disease Mice. PLoS One. 2016 Mar 31;11(3):e0152498. [4]. Bieszczad KM, et al. Histone Deacetylase Inhibition via RGFP966 Releases the Brakes on Sensory Cortical Plasticity and the Specificity of Memory Formation. J Neurosci. 2015 Sep 23;35(38):13124-32.
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