| 描述 |
GSK2850163 是一个新型的肌醇需要酶-1α (IRE1α) 抑制剂,它可抑制 IRE1α 的激酶活性和 RNA 酶活性,其 IC50 值分别为 20 和 200 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 20 nM (IRE1α kinase activity), 200 nM (IRE1α RNase activity)[1]
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| 体外研究 |
GSK2850163是肌醇需要酶-1α(IRE1α)的新型抑制剂,可抑制IRE1α激酶活性和RNase活性,IC50分别为20和200 nM。 GSK2850163可以剂量依赖性方式降低IRE1α的自身磷酸化程度。增加浓度的GSK2850163能够降低增加的XBP1转录活性。另外两种激酶被GSK2850163弱抑制：Ron(IC50 =4.4μM)和FGFR1 V561M(IC50 =17μM)[1]。
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| 激酶实验 |
在ADP-Glo测定中，GSK2850163对pIRE1α激酶活性的效力被测量为其对内在的，减慢的ATP水解活性的抑制。将各种浓度的100纳升的GSK2850163二甲基亚砜溶液加入384孔板中。用含有30mM NaCl，10mM MgCl 2,1mM DTT，0.02％Chaps和0.01mg / mL牛血清白蛋白的10mL 50mM Hepes缓冲液（pH 7.5）中的5nMpIRE1α和60mM ATP进行反应。 。 2小时后，通过加入5mL ADP-Glo试剂I终止反应，其也消耗剩余的ATP。孵育1小时后，向反应中加入5mL ADP-Glo试剂II，将ADP产物转化为ATP，作为偶联荧光素/荧光素酶反应的底物。 30分钟后，在微孔板成像仪[1]上读板。
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| 细胞实验 |
将PANC-1细胞以5.0×103细胞/孔的密度接种到6孔板中，在含有10％FBS的RPMI 1640培养基中。用含有5次重复的XBP-1 DNA结合位点和pRL-SV40的pGL3-5x未折叠蛋白反应元件（UPRE） - 荧光素酶报告基因共转染细胞，使用FuGENE6转染试剂。 48小时后，用2.5mg / mL衣霉素处理细胞1小时，然后用GSK2850163处理16小时。使用Dual-Glo Luciferase Assay试剂盒测量荧光素酶表达，并将其标准化为Renilla表达水平[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Nestor O. Concha, et al. Long-Range Inhibitor-Induced Conformational Regulation of Human IRE1α Endoribonuclease Activity. Molecular Pharmacology December 2015, 88 (6) 1011-1023.
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