| 描述 |
Necrostatin 2 是一种有效的程序性坏死 (necroptosis) 抑制剂。作用于TNF-α处理的FADD缺陷型Jurkat T细胞,抑制程序性坏死,EC50 为 0.05 μM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
Necroptosis[1]
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| 体外研究 |
使用用TNF-α处理的人Jurkat T细胞的FADD缺陷型变体进行坏死性凋亡抑制活性的评估。利用这些条件,细胞有效地经历坏死性凋亡,其被Necrostatin 2(EC50 = 50nM)完全和选择性地抑制。 Necrostatin 2在广泛的坏死性凋亡细胞系统中显示出活性[1]。 30μM的Necrostatin 2完全保护L929细胞免受TNF-α诱导的坏死性凋亡。除TNF-α外,泛半胱氨酸蛋白酶抑制剂苄氧基羰基-Val-Ala-Asp(OMe)-氟甲基酮(zVAD.fmk)也被发现可诱导L929细胞坏死,Necrostatin 2可有效抑制这种坏死[2]。 。用TNF-α处理的FADD缺陷型Jurkat T细胞抑制坏死样凋亡的EC50为0.05μM[3]。
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| 激酶实验 |
使用用TNF-α处理24小时的人Jurkat T细胞的FADD缺陷型变体进行坏死性凋亡抑制活性的评估。在这些条件下，细胞经历坏死性凋亡（DMSO对照具有~40％的活力），其被作为阳性对照的Necrostatin 2（EC50 = 0.21±0.2μM）抑制。对于EC50值测定，在浓度增加的测试化合物存在下，用10 ng / mL人TNF-α处理细胞（0.029,0.058,0.12,0.33,0.46,0.93,1.9,3.7,11.1,33和100μM） ）一式两份，持续24小时，然后进行基于ATP的活力评估。 EC50值±SD由至少两个独立实验确定[2]。
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| 细胞实验 |
在DMSO（对照），30μMNecrostatin2存在下，用10ng / mL人TNF-α或100μMzVAD.fmk处理L929细胞（100000细胞/ mL，100μL/孔，在96孔板中），或者在37℃下在含有5％CO 2的潮湿培养箱中24小时，然后进行基于ATP的活力评估，如前面实验中所述。首先制备在DMSO中的储备溶液（30mM），然后用DMSO稀释，得到测试溶液。每个样品一式两份进行。最终的DMSO浓度为0.5％。调整细胞活力值以解释非特异性毒性，其在大多数情况下<10％。报告的细胞存活率值（％）±SD由两个独立的实验确定[2]。
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| 参考文献 |
[1]. Teng X, et al. Structure-activity relationship study of [1,2,3]thiadiazole necroptosis inhibitors. Bioorg Med Chem Lett. 2007 Dec 15;17(24):6836-40. [2]. Jagtap PG, et al. Structure-activity relationship study of tricyclic necroptosis inhibitors. J Med Chem. 2007 Apr 19;50(8):1886-95. [3]. Teng X, et al. Structure-activity relationship study of novel necroptosis inhibitors. Bioorg Med Chem Lett. 2005 Nov 15;15(22):5039-44.
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