CVT-313

CVT-313 是一种有效的ATP-竞争性的选择性 CDK2 抑制剂,IC50 为 0.5 μM。

研究领域 >> 癌症

cdk2/cyclin A:0.5 μM (IC50)

Cdk1/cyclin B:4.2 μM (IC50)

Cdk4/cyclin D1:215 μM (IC50)

CVT-313已被证明可抑制其他激酶,但IC50值更高,即CDK1(IC50 =4.2μM),CDK4 D1(IC50 =215μM)和MAPK/PKA/PKC(IC50> 1.25 mM),与CDK2相比(IC50 =0.5μM)。 CVT-313在浓度为5-20μM时对细胞增殖有显着影响[1]。 CVT-313是一种有效的CDK2抑制剂,可从嘌呤类似物库中鉴定,体外IC50为0.5μM。抑制作用相对于ATP(Ki = 95 nM)是竞争性的,并且选择性CVT-313对其他非相关的ATP依赖性丝氨酸/苏氨酸激酶没有影响。当添加到CDK1或CDK4时,对于酶活性的半数最大抑制,需要8.5和430倍更高浓度的CVT-313。使用正常和肿瘤人/鼠细胞系,测量CVT-313对细胞增殖的作用。生长抑制的IC50范围为1.25至20μM[2]。

对于激酶测定，将纯化的CDC5L（295-795）-His6与[γ-32P] ATP，COS-7细胞提取物混合，并在100μL20mMHEPES，pH 7.5,50mM NaCl，2mM MnCl 2中孵育10将mM MgCl 2,0.5％NP-40,0.5mM PMSF，5mM苯甲脒盐酸盐，5mM NaF，1mM NaVO 3和特异性抑制剂在30℃下保持10分钟。细胞提取物作为激酶活性来源于亚汇合，血清刺激的COS-7细胞制备，该细胞在20mM HEPES-NaOH，pH 7.5,50mM NaCl，1％Triton X-100,10％甘油，蛋白酶和磷酸酶抑制剂中裂解。 。通过在15％聚丙烯酰胺-SDS凝胶中电泳分离磷酸化蛋白质。特异性抑制剂包括20μM星形孢菌素，10μM染料木黄酮，1μMCVT-313,10μMRp-MB-cAMPS和50μMPD98059[1]。

MRC-5细胞在含有5％胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基中生长。将CVT313（0,5,10,15μM）添加至组织培养物中指数生长的细胞。测量细胞群。在暴露48小时后，使用非放射性CellTiter 96试剂盒进行增殖测定。对于DNA含量的FACS分析，将细胞用胰蛋白酶消化，在70％冰冷的乙醇中固定，并用0.1mg / mL RNase A和40μg/ mL碘化丙啶在37℃下处理1小时[2]。

[1]. Graub R, et al. Cell cycle-dependent phosphorylation of human CDC5 regulates RNA processing. Cell Cycle. 2008 Jun 15;7(12):1795-803.

[2]. Brooks EE, et al. CVT-313, a specific and potent inhibitor of CDK2 that prevents neointimal proliferation. J Biol Chem. 1997 Nov 14;272(46):29207-11.

N-[5-[(4-乙基-1-哌嗪基)甲基]-2-吡啶基]-5-氟-4-[4-氟-2-甲基-1-异丙基-1H-苯并咪唑-6-基]-2-嘧啶胺甲烷磺酸盐 | 瑞博西尼 | Dinaciclib | THZ1 | Roscovitine | THZ531 | 2-[[(噻吩-2-基)甲基]氨基]-5-[1-(喹啉-6-基)甲-(Z)-亚基]噻唑-4-酮 | 夫拉平度 | NVP-2 | 阿维西利 | CYC065 | 4-[2-甲基-1-异丙基-1H-咪唑-5-基]-N-[4-(甲磺酰基)苯基]-2-嘧啶胺 | GSK 3抑制剂IX | 肯帕罗酮 | SNS-032 (BMS-387032)