Neoseptin 3

Neoseptin 3 是 Toll 样受体 4/髓样分化因子 2 (mTLR4/MD-2) 的激动剂,其 EC50 值为 18.5 μM。

信号通路 >> 免疫及炎症 >> Toll样受体(TLR)

研究领域 >> 癌症

EC50: 18.5 μM (mTLR4/MD-2) [1]

Neoseptin 3是Toll样受体4 /髓样分化因子2(mTLR4/MD-2)激动剂,EC50为18.5μM。 Neoseptin-3以浓度依赖性方式诱导巨噬细胞产生TNFα。 Neoseptin-3诱导IκB激酶α(IKKα),IKKβ,p38,c-Jun N-末端激酶(JNK)和ERK的磷酸化,以及IκBα的降解,与MAPK的活化和经典NF-κB信号传导一致。 TANK结合激酶1(TBK1)和IRF3磷酸化也响应于Neoseptin-3 [1]而增加。

用NF-κB依赖性荧光素酶报告质粒转染HEK293T细胞，通过在含有嘌呤霉素的DMEM中培养选择具有稳定表达的克隆。用小鼠或人TLR4加小鼠或人MD-2的构建体共转染细胞，2天后用50μMNeoseptin-3或1μg/ mL LPS刺激6小时。裂解细胞，测量荧光素酶活性[1]。

将细胞以每孔1×10 5个细胞接种到96孔板上，并用Neoseptin-3刺激[溶于DMSO;最终DMSO浓度（≤0.2％）在所有实验中保持恒定] 4小时。根据制造商的说明，通过ELISA试剂盒测量上清液中的小鼠TNFα，IL-6或IFN-β或人TNFα。除非另有说明，否则小鼠细胞来自野生型C57BL / 6J小鼠[1]。

[1]. Wang Y, et al. TLR4/MD-2 activation by a synthetic agonist with no similarity to LPS. Proc Natl Acad Sci U S A. 2016 Feb 16;113(7):E884-93.

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