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ML-323

ML-323用途

ML-323 是一种有效的可逆的 USP1-UAF1 抑制剂,在Ub-Rho实验中,IC50 为 76 nM。

ML-323名称

[ CAS 号 ]:
1572414-83-5

[ 中文名 ]:
ML-323

[ 英文名 ]:
ML 323

[英文别名 ]:

ML-323

ML-323生物活性

[ 描述 ]:

ML-323 是一种有效的可逆的 USP1-UAF1 抑制剂,在Ub-Rho实验中,IC50 为 76 nM。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> 去泛素化酶

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

IC50: 76 nM (USP1-UAF1, in Ub-Rho assay)[1] Ki: 68 nM (USP1-UAF1)[1]

[体外研究]

ML-323(ML323)是USP1-UAF1脱遍在蛋白酶复合物的高效抑制剂,对人DUB,脱氧酶,脱鞘酶和无关蛋白酶具有出色的选择性。 ML-323是一种有效的USP1-UAF1抑制剂,在泛素-罗丹明(Ub-Rho)测定中IC50值为76 nM,在使用K63连接的双泛素(di-Ub)的正交凝胶测定中为174 nM和820 nM单泛素化的PCNA(Ub-PCNA)分别作为底物。 ML-323可能通过变构机制发挥其抑制作用。测得的游离酶(Ki)和酶-底物复合物(K'i)的ML-323抑制常数为68nM和183nM。此外,ML-323可增强非小细胞肺癌和骨肉瘤细胞中顺铂的细胞毒性[1]。 ML-323(ML323),一种探针分子,具有可逆的纳摩尔抑制活性和对USP1/UAF1的优异选择性。此外,ML-323增强了顺铂的细胞毒性,并增加了PCNA和FANCD2的内源性单泛素化水平,两种已知的USP1/UAF1细胞靶标[2]。

[激酶实验]

对于DUB分析，ML-323以10μM的单剂量一式两份进行测试。使用Ub-7-酰氨基-4-甲基香豆素（AMC）作为底物监测DUB活性。随着时间监测来自游离AMC的荧光信号的增加，尽管仅使用斜率的初始线性部分（信号/分钟）进行分析。没有化合物的酶的活性被视为100％。对于蛋白酶分析，ML-323使用从20μM开始的针对70种蛋白酶的三倍连续稀释进行测试。在加入适当的酶底物之前，将蛋白酶与化合物预温育5-15分钟。通过读取荧光标记肽的荧光信号来测量酶活性[1]。

[细胞实验]

使用CCK-8溶液通过细胞计数试剂盒（CCK）测定法测量细胞活力。对于集落形成测定，将细胞以每孔300-500个细胞的密度接种在六孔板中并生长过夜。然后用指定浓度的单独的ML-323，单独的顺铂或顺铂和ML-323（1：1或1：4）的组合处理细胞。用等体积DMSO和盐水处理的细胞用作对照。处理48小时后，加入新鲜生长培养基，并将细胞再孵育5-10天以允许集落形成。对于UV组合处理，用指定浓度的ML-323或等体积的DMSO处理细胞。 48小时后，除去培养基，以指定剂量在254nm照射细胞。加入新鲜生长培养基，并将细胞再孵育5-10天以允许集落形成。没有UV照射但用ML-323或等体积DMSO处理的细胞用作对照并指定为100％。形成菌落后，用甲醇固定细胞，用0.5％结晶紫染色。对由> 50个细胞组成的集落进行评分。菌落数由一式三份平板确定。使用GraphPad Prism生成剂量 - 反应曲线，并使用CalcuSyn进行分析以计算组合指数，该组合指数是在加入顺铂和USP1-UAF1抑制剂的固定比例后受影响的细胞分数[1]。

[参考文献]

[1]. Liang Q, et al. A selective USP1-UAF1 inhibitor links deubiquitination to DNA damage responses. Nat Chem Biol. 2014 Apr;10(4):298-304.

[2]. Dexheimer TS, et al. Discovery of ML323 as a Novel Inhibitor of the USP1/UAF1 Deubiquitinase Complex. National Center for Biotechnology Information; 2010-2012 Oct 23.

[相关活性小分子]

BAY 11-7082 | P005091 | 2,6-二氨基-3,5-二硫氰基吡啶 | VLX1570 | (2E)-3-(6-溴-2-吡啶基)-2-氰基-N-[(1S)-1-苯基丁基]-2-丙烯酰胺 | 1-[5-[(2,4-二氟苯基)硫基]-4-硝基-2-噻吩基]乙酮 | 的DUB-IN-2 | ML364 | (3E,5E)-3,5-二[(4-硝基苯基)亚甲基]-1-(1-氧代-2-丙烯-1-基)-4-哌啶酮 | GEN6776 | HBX 19818 | 1-[1-(4-氟苯基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-基]-2-(1-吡咯烷基)乙酮 | LDN-57444 | 4-氰基-5-[(3,5-二氯-4-吡啶基)硫基]-N-[4-(甲基磺酰基)苯基]-2-噻吩甲酰胺

ML-323物理化学性质

[ 密度 ]:
1.2±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
515.4±60.0 °C at 760 mmHg

[ 分子式 ]:
C₂₃H₂₄N₆

[ 分子量 ]:
384.477

[ 闪点 ]:
265.5±32.9 °C

[ 精确质量 ]:
384.206238

[ PSA ]:
68.52000

[ LogP ]:
4.61

[ 蒸汽压 ]:
0.0±1.3 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.651

[ 储存条件 ]:
2-8°C

ML-323安全信息

[ 符号 ]:

GHS07

[ 信号词 ]:
Warning

[ 危害声明 ]:
H315-H319-H335

[ 警示性声明 ]:
P261-P305 + P351 + P338

[ 危险品运输编码 ]:
NONH for all modes of transport