IPI-3063

IPI-3063 是一种有效的选择性 PI3K p110δ 抑制剂,IC50 为 2.5±1.2 nM。

研究领域 >> 炎症/免疫

p110δ:2.5 nM (IC50)

p110α:1170 nM (IC50)

p110β:1508 nM (IC50)

p110γ:2187 nM (IC50)

IPI-3063抑制p110α,p110β和p110γ,IC50分别为1171±533 nM,1508±624 nM和2187±1529 nM。 IPI-3063有效降低小鼠B细胞增殖,存活和浆母细胞分化,同时增加抗体类别转换为IgG1。 IPI-3063是一种p110δ选择性化合物,在p110δ特异性细胞分析中IC50 = 0.1 nM,其他I类PI3K亚型的细胞IC50值至少高出1,000倍(对于p110α,IC50 = 1901±1318 nM,对于p110β,IC 50 = 102.8±35.7nM,对于p110γ,IC 50 = 418.8±117.2nM。 IPI-3063在降低p-AKT方面非常有效(在1 nM时有显着效果)。 IPI-3063还可降低p-ERK1/2,在10 nM时具有显着效果。 IPI-3063是非常有效的,当存在10nM时,B细胞存活率显着降低[1]。

使用人重组PI3K-α，PI3K-β，PI3K-δ和PI3K-γ。使用磷脂酰肌醇4,5双磷酸（diC8-PtdIns（4,5）P2）。 PI3K-α，β和δ是由全长p110α，p110β或p110δ催化亚基和p85α调节亚基组成的异二聚体。 PI3K-γ是p110γ催化亚基的单体。将激酶样品（10nM-α，β和δ; 20nM-γ）与IPI-3063在室温下在反应缓冲液（15mM HEPES pH 7.4,20mM NaCl，1mM EGTA，0.02）中孵育30分钟。 ％吐温20,10mM MgCl 2,0.2mg / mL牛γ-球蛋白），然后加入ATP / diC8-PtdIns（4,5）P2混合物，得到3mM ATP和500μMdiC8-PtdIns的最终浓度（4 ，5）P2。将反应在室温下孵育2小时，评估PI3K活性。在发光模式下在平板读数器上读取平板[1]。

首先通过密度梯度离心从血液中纯化外周血单核细胞（PBMC）。然后通过阴性选择从PBMC中纯化人B细胞。通过使用抗CD19 PE缀合的抗体的FACS分析测量，B细胞纯度从4％增加至> 70％。将纯化的B细胞接种，终浓度为0.1×106个细胞/ mL，并用2μg/ mL人CD40L +5μg/ mL抗人IgM / IgG +100μg/ mL hIL-2 +100μg/ mL hIL培养。 -21。所有B细胞在补充有10％（体积/体积）热灭活的FCS，5mM Hepes，2mM L-谷氨酰胺，100U / mL青霉素，100μg/ mL链霉素，50μM2-巯基乙醇的RPMI 1640中培养。纯化的人B细胞用IPI-3063（0.1,1,10和100nM）预处理30分钟，然后用人CD40L +抗人IgM / IgG +人IL-2 +人IL-21刺激120小时。 [1]。

[1]. Chiu H, et al. The Selective Phosphoinoside-3-Kinase p110δ Inhibitor IPI-3063 Potently Suppresses B Cell Survival, Proliferation, and Differentiation. Front Immunol. 2017 Jun 30;8:747.

3-甲基腺嘌呤 | LY294002 | 渥曼青霉素 | Alpelisib (BYL719) | 5-[2,6-二(4-吗啉基)-4-嘧啶基]-4-(三氟甲基)-2-吡啶胺 | IPI549 | 2-氨基-N-[2,3-二氢-7-甲氧基-8-[3-(4-吗啉基)丙氧基]咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基]-5-嘧啶甲酰胺 | 艾代拉里斯 | Dactolisib (BEZ235) | 槲皮素 | SAR405 | 2-(1H-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)-1-哌嗪基]甲基]-4-(4-吗啉基)噻吩并[3,2-D]嘧啶 | 740 Y-P | LY3023414 | 1,3-二咖啡酰奎宁酸