吉瑞替尼的作用和生物活性

发布时间:2018-11-04 18:31:21 编辑作者:活性达人

吉瑞替尼图片

图片:吉瑞替尼结构式

吉瑞替尼是FMS相关酪氨酸激酶3(FLT3)和AXL酪氨酸激酶受体的有效抑制剂(IC50分别为0.29nM和<1nM)。在临床前研究中,吉瑞替尼显示出强烈的抗白血病和抗肿瘤作用。吉瑞替尼目前正在进行急性髓性白血病的几项3期临床试验。那么它的生物活性是什么?如何做实验呢?下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍吉瑞替尼的生物活性:
1)体外活性
在测试的78种酪氨酸激酶中,吉瑞替尼(ASP2215)在1nM时抑制FLT3,白细胞酪氨酸激酶(LTK),间变性淋巴瘤激酶(ALK)和AXL激酶超过50%,FLT3的IC50值为0.29nM,约为800-比c-KIT更有效[1]。在1nM(FLT3,LTK,ALK和AXL)或5nM(TRKA,ROS,RET和MER)的浓度下,吉瑞替尼抑制78种测试激酶中的8种的活性超过50%。

FLT3的IC50为0.29nM,AXL的IC50为0.73nM。吉替替尼抑制FLT3的IC50比抑制c-KIT(230nM)所需的浓度高约800倍。针对MV4-11和MOLM-13细胞评估吉瑞替尼的抗增殖活性,其内源性表达FLT3-ITD。治疗5天后,吉瑞替尼抑制MV4-11和MOLM-13细胞的生长,平均IC50分别为0.92nM(95%CI:0.23-3.6nM)和2.9nM(95%CI:1.4-5.8nM)。MV4-11细胞的生长抑制伴随着FLT3磷酸化的抑制。相对于载体对照细胞,在分别用0.1nM,1nM和10nM吉瑞替尼处理2小时后,磷酸化的FLT3水平分别为57%,8%和1%。

此外,低至0.1nM或1nM的剂量导致磷酸化ERK,STAT5和AKT的抑制,所有这些都是FLT3活化的下游靶标。为了研究吉替替尼对AXL抑制的作用,用吉替替尼处理表达外源性AXL的MV4-11细胞。在1nM,10nM和100nM的浓度下持续4小时,吉瑞替尼处理使磷酸化的AXL水平分别降低38%,29%和22%[2]。

2)体内活性
在MV4-11异种移植小鼠中,吉瑞替尼(ASP2215)在肿瘤中的浓度比用10mg/kg口服吉瑞替尼4天的血浆中的浓度高20倍以上。吉替替尼治疗28天导致MV4-11肿瘤生长的剂量依赖性抑制,并诱导超过6mg/kg的完全肿瘤消退。此外,吉瑞替尼可降低骨髓中的肿瘤负荷并延长静脉移植MV4-11细胞的小鼠的存活[1]。

我们已经了解了它的生物活性,接下来如何做活性实验呢?一般来说,有如下的三种方法:

1)动物实验
小鼠[1]-在移植有MV4-11AML细胞的裸鼠中评估抗肿瘤活性。还研究了异种移植小鼠中的药代动力学。用10mg/kg口服吉替替尼治疗MV4-11异种移植小鼠4天。吉替替尼治疗28天导致MV4-11肿瘤生长的剂量依赖性抑制,并导致完全肿瘤消退超过6mg/kg[1]。

2)细胞实验
使用CellTiter-Glo发光细胞存活力测定评估吉替替尼对MV4-11和MOLM-13细胞的作用。进行后续研究以检查吉瑞替尼和Quizartinib对表达FLT3-ITD,FLT3-D835Y,FLT3-ITD-D835Y,FLT3-ITD-F691L或FLT3-ITD-F691I的Ba/F3细胞的作用。用DMSO或递增浓度的吉替替尼(0.01,0.1,1,10和100nM)处理MV4-11和MOLM-13细胞5天,并使用CellTiter-Glo测量细胞活力[2]。

3)激酶实验
使用ATP浓度测试针对一组78种测试激酶的吉替替尼的激酶抑制活性,所述ATP浓度近似等于TK-ELISA或片外迁移率变动测定中每种激酶的Km值。

最初,测试两种浓度的吉替替尼(1nM和5nM)以评估每种化合物对TK活性的抑制作用。然后使用剂量范围的吉替替尼进行进一步研究以确定激酶的IC50值,其中用1nM吉替替尼以及c-KIT抑制活性>50%。TK-ELISA和MSA测定用于进行FLT3,LTK,AXL和c-KIT的IC50研究;进行HTRFKinEASE-TK测定以评估棘皮动物微管相关蛋白样4-ALK(EML4-ALK)的IC50值[2]。

今天介绍了吉瑞替尼的作用,并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述,吉瑞替尼是一种有效的FLT3/AXL抑制剂,IC50分别为0.29nM/0.73nM。它的靶点活性为FLT3,AXL。

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参考文献:
[1]. ASP2215, a novel FLT3/AXL inhibitor: Preclinical evaluation in acute myeloid leukemia (AML). 2014 ASCO Annual Meeting.
[2]. Mori M, et al. Gilteritinib, a FLT3/AXL inhibitor, shows antileukemic activity in mouse models of FLT3 mutated acute myeloid leukemia. Invest New Drugs. 2017 Oct;35(5):556-565.

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