鸢尾黄素（CAS 548-77-6）为异黄酮苷元，分子式 C₁₈H₁₆O₈，平均分子量 360.31，结构中含酚羟基与甲氧基。酚羟基赋予其一定极性、弱酸性和金属络合能力，甲氧基提高脂溶性。该理化特征决定反相液相色谱、液相色谱-质谱联用、薄层色谱及衍生化气相色谱-质谱均可用于分析，其中反相高效液相色谱-二极管阵列检测与液相色谱-串联质谱是定性定量核心方法。
高效液相色谱-紫外/二极管阵列检测
反相C18柱是分离鸢尾黄素的首选固定相。流动相采用乙腈-水或甲醇-水体系，加入0.1%甲酸或0.1%磷酸抑制酚羟基解离，改善峰形。梯度洗脱将鸢尾黄素与同系异黄酮、苷类及基质干扰物分离。DAD采集200-400 nm光谱，定性依据保留时间、紫外吸收光谱匹配及标准品共进样。异黄酮骨架在260-280 nm和320-350 nm有特征吸收，鸢尾黄素定量通道可设于267 nm与340 nm。外标法定量时建立峰面积-浓度校准曲线，以线性范围、相关系数、检出限、定量限、日内与日间精密度、加样回收率评价方法。
液相色谱-串联质谱
ESI源负离子模式适合鸢尾黄素。分子式 C₁₈H₁₆O₈ 给出M−H⁻ m/z 359.0772，M+H⁺ m/z 361.0918。多反应监测选择特征母离子-子离子对，以保留时间和离子丰度比定性，以峰面积定量。该法灵敏度高于UV，适用于血浆、组织、细胞及复杂植物提取物中痕量鸢尾黄素。基质效应用基质匹配校准或同位素内标校正。高分辨质谱可测定精确质量数，结合碎片离子解析提高结构鉴别能力。
气相色谱-质谱
鸢尾黄素含多个羟基，挥发性低。直接GC分析不可行。三甲基硅烷化试剂将羟基转化为三甲基硅醚后，衍生物可进入毛细管GC柱。EI-MS提供碎片指纹，SIM模式定量。该方法适用于非水基质或需与挥发性成分同时分析场景，但衍生化步骤增加误差来源，液相色谱-质谱更为直接。
薄层色谱与高效薄层色谱
硅胶G板或硅胶60 F₂₅₄板可用于快速鉴别。展开剂采用氯仿-甲醇-甲酸、甲苯-乙酸乙酯-甲酸等体系。紫外254 nm下暗斑，366 nm下荧光淬灭或增强；喷以AlCl₃乙醇液后异黄酮酚羟基络合产生黄色荧光，用于专属检出。高效薄层色谱结合光密度扫描可实现半定量至定量分析，适合药材指纹图谱与批次筛查。
毛细管电泳
硼酸盐缓冲液中，鸢尾黄素酚羟基部分解离，电泳淌度受pH调控。毛细管区带电泳-紫外检测可分离异黄酮混合物，定量依据峰面积。该方法有机溶剂消耗低，但重现性依赖缓冲液组成与毛细管状态，应用范围窄于反相液相色谱。
样品前处理与质量控制
植物材料经干燥、粉碎，以甲醇或70%乙醇超声提取；含苷类样品经盐酸-甲醇水解测定总苷元。生物样品采用蛋白沉淀、液液萃取或C18固相萃取净化。所有方法均以鸢尾黄素对照品建立校准，定性需保留时间、光谱或质谱碎片三重匹配，定量需覆盖线性、检出限、定量限、精密度、准确度、回收率与稳定性。反相HPLC-DAD用于常规定量，LC-MS/MS用于痕量鉴别与药代研究，HPTLC用于快速筛查，GC-MS用于衍生化专项分析。