N,N-二羟乙基甘氨酸（Bicine，CAS 150-25-4，分子式C₆H₁₃NO₄，相对分子质量163.17）是一种两性离子缓冲剂，pKa₁=2.2（羧基），pKa₂=8.3（叔胺基）。在化工过程控制和实验室分析中，Bicine浓度测定根据样品基质和浓度范围采用酸碱电位滴定法、离子色谱法和亲水作用色谱-蒸发光散射法。
一、酸碱电位滴定法
Bicine在水溶液中以两性离子形式存在，结构式为(HOCH₂CH₂)₂N⁺H-CH₂COO⁻。其叔胺基的共轭酸pKa=8.3，因此该两性离子可作为一元酸被强碱滴定。用标准NaOH溶液滴定时发生反应：
(HOCH₂CH₂)₂N⁺H-CH₂COO⁻ + OH⁻ → (HOCH₂CH₂)₂N-CH₂COO⁻ + H₂O
试剂与仪器：0.1000 mol/L NaOH标准溶液（用邻苯二甲酸氢钾标定）；自动电位滴定仪配备pH复合电极。
操作步骤：准确移取待测液25.00 mL于滴定杯中，加入去离子水20 mL，置于滴定仪上。用NaOH标准溶液滴定，记录pH-V曲线，终点由pH曲线的二阶导数极大值确定。空白试验同法操作，但不加样品。
计算：c(Bicine) =c(NaOH)×(V终−V空) / V样，其中V终和V空分别为滴定终点和空白时消耗的NaOH体积。
该方法适用于无其他酸碱杂质的纯水溶液。若样品含金属离子或非挥发性盐，需先通过强酸性阳离子交换树脂柱以排除干扰。
二、离子色谱法
在碱性淋洗液中，Bicine的羧基完全解离，形成带负电的阴离子。阴离子交换柱对不同大小的阴离子具有选择性，Bicine在柱上保留后，用抑制型电导检测器定量。
一种成熟的分析条件为：分离柱为Dionex IonPac AS11-HC阴离子交换柱（250 mm×4 mm），保护柱为AG11-HC。淋洗液采用KOH梯度，初始浓度5 mmol/L，20 min内线性增至30 mmol/L；流速1.0 mL/min；柱温30 °C；抑制器电流50 mA；进样量25 μL。
标准曲线：分别配制质量浓度为0.50、1.00、2.00、5.00、10.00 mg/mL的Bicine水溶液，按上述条件测定。以峰面积对质量浓度线性回归，回归系数R²>0.999。样品经0.22 μm滤膜过滤后直接进样，根据回归方程计算浓度。
离子色谱法不受样品中无机阴离子如Cl⁻、NO₃⁻、SO₄²⁻干扰，因为这些离子的保留时间与Bicine不同。若出现Bicine与未知峰重叠，减小梯度斜率后即可分离。
三、亲水作用色谱-蒸发光散射检测法（HILIC-ELSD）
Bicine极性极强，在反相色谱中无保留，因此采用亲水作用色谱（HILIC）模式。HILIC固定相为极性硅胶表面，流动相中水含量较低时，Bicine在水化层中分配，实现保留。ELSD检测器不依赖待测物的光学性质，适合无紫外吸收的化合物。
色谱条件：色谱柱为Atlantis HILIC Silica（4.6 mm × 250 mm，5 μm）。流动相为乙腈-20 mmol/L甲酸铵水溶液（85:15，v/v），等度洗脱；流速1.0 mL/min；柱温35 °C。ELSD参数：漂移管温度50 °C，氮气喷雾压力0.2 MPa。
定量方法：配制浓度序列为1.00、2.00、5.00、10.00、20.00 mg/mL的Bicine标准溶液，进样10 μL。由于ELSD响应非严格线性，采用双对数回归：lg A = a + b lg C，其中A为峰面积，C为质量浓度。样品溶液用流动相稀释后进样，记录峰面积，代入回归式计算浓度。
该方法耐受流动相中非挥发性盐较少，实际使用中应精确配制甲酸铵浓度。ELSD增益设置为1，保证信号在检测器线性范围内。
四、方法选型
酸碱滴定法操作成本低，适用于Bicine含量高于1 mmol/L的溶液，测量结果符合常规分析误差要求。离子色谱法灵敏度高，用于痕量Bicine的测定，且能同时分离共存无机阴离子。HILIC-ELSD法适用于需要与紫外吸收杂质分离的样品，但其对温度和流速波动敏感，需严格控制色谱系统。
实际工业过程控制中，任何方法进样前均需对含悬浮颗粒的待测液进行过滤。对于高精度定量，优先采用电位滴定或离子色谱法；对于含有机物共存的复杂样品，HILIC-ELSD法提供可靠的分离能力。